孕期邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯暴露对胎鼠生长及子代空间记忆的影响

发布时间：2020-09-23 08:02

　　研究背景及目的邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP)是目前被广泛应用于工业生产和日常消费品中的邻苯二甲酸酯类化合物,是典型的环境内分泌干扰物,人体可通过多种途径和来源暴露于DEHP。大量研究显示,DEHP具有潜在的发育毒性,包括胚胎发育毒性及神经发育毒性。本研究主要探讨孕期DEHP暴露是否能引起胎鼠宫内生长受限,这种不良妊娠结局是否存在敏感期和性别差异以及不同孕期DEHP暴露对子代空间学习记忆能力的影响。方法本研究共分为以下三个部分:第一部分:ICR孕鼠随机分为3组,分别为对照组(单纯玉米油组)、50 mg/kg DEHP组、200 mg/kg DEHP组,按体重的1%于妊娠第0天(Gestational day 0,GD0)对孕鼠进行灌胃处理至GD17,每天记录孕鼠的体重和饲料消耗量。于GD18上午剖杀孕鼠,记录子宫连胎重、死胎数、活胎数以及吸收胎数,称量活胎体重和头臀长,并通过肛殖距辨认胎鼠性别,若肛殖距不能确定胎鼠性别,可通过解剖观察其内生殖器来判断。第二部分:ICR孕鼠随机分为6组,处理组给予200 mg/kg DEHP灌胃处理,处理时间分别为孕早期(GD0-GD6)、孕中期(GD7-GD12)、孕晚期(GD13-GD17),并设置相应的对照组,对照组给予玉米油灌胃处理,每天记录孕鼠的体重和饲料消耗量。孕鼠于GD18上午剖杀,及时记录子宫连胎重、胎盘重、胎盘直径、胎鼠体重和头臀长,并通过肛殖距辨认胎鼠性别,若肛殖距不能确定胎鼠性别,可通过解剖观察其内生殖器来判断,同时也要记录死胎数、活胎数以及吸收胎数等。对胎盘病理切片进行免疫组织化学检测和HE染色,分别观察Ki67阳性细胞的表达与分布情况及胎盘迷路层的血窦面积比。第三部分:ICR孕鼠随机分为4组,处理组给予200 mg/kg DEHP灌胃处理,处理时间分别为孕中期(GD7-GD12)、孕晚期(GD13-GD17),设置相应的对照组,给予玉米油灌胃处理。孕鼠分娩后,组内调整每窝仔鼠只数,10只/窝,雌雄各半。仔鼠在3周龄时断乳并将雌雄仔鼠分开饲养,每天监测仔鼠的体重变化和进食情况。在仔鼠8周龄时(成年期)进行Morris水迷宫实验,观察成年期子代空间学习记忆能力的改变。结果在第一部分的研究中,对照组、50 mg/kg、200 mg/kg DEHP处理组总胎鼠体重分别为(1.376±0.018)g、(1.271±0.015)g和(1.173±0.026)g,与对照组相比,处理组胎鼠体重均降低,差异具有统计学意义(F=26.826,P0.01);雌性胎鼠体重分别为(1.341±0.020)g、(1.245±0.020)g和(1.108±0.030)g,与对照组相比,处理组胎鼠体重均降低,差异具有统计学意义(F=25.102,P0.01);雄性胎鼠体重分别为(1.410±0.016)g、(1.302±0.010)g和(1.220±0.02)g,与对照组相比,处理组胎鼠均体重降低,差异具有统计学意义(P0.01);另外,处理组胎鼠的头臀长与对照组相比也有显著的降低。在第二部分的研究中,孕早期、孕中期、孕晚期暴露组及对应的对照组胎鼠体重分别为(1.338±0.025)g、(1.312±0.025)g、(1.241±0.023)g和(1.401±0.015)g、(1.401±0.025)g、(1.402±0.025)g,与对照组相比,孕中、晚期胎鼠体重降低,差异具有统计学意义(P0.01);孕早期、孕中期、孕晚期暴露组及对应的对照组胎鼠头臀长分别为(23.53±0.23)g、(23.27±0.20)g、(23.21±0.21)g和(24.41±0.23)g、(24.42±0.29)g、(24.41±0.22)g,与对照组相比,孕早、中、晚期胎鼠头臀长降低,差异具有统计学意义(P0.01)。胎盘重量分别为(0.086±0.003)g、(0.083±0.004)g、(0.086±0.002)g和(0.098±0.005)g、(0.097±0.002)g、(0.097±0.003)g,与对照组相比,孕中期胎盘重量降低,差异有统计学意义(P0.01);另外,孕中期暴露组的胎盘迷路层血窦面积比及细胞增殖均较对照组降低,而对孕早、晚期暴露组的胎盘影响不明显。在第三部分Morris水迷宫实验中,与对照组相比,孕中期暴露组的成年雌性子代第一天和第三天的潜伏期明显延长,第四天到第六天恢复正常;孕中期、孕晚期暴露组的成年雄性子代第三天的潜伏期明显延长,第四天到第六天恢复正常;第7天孕晚期暴露组的雄性成年小鼠经过目标象限的次数、平均运动距离缩短,潜伏期延长(P0.05)。结论孕期DEHP暴露可导致胎鼠宫内生长受限,这种损伤在雌雄胎鼠中均有发生,不具有性别依赖性;胎鼠宫内生长受限的敏感期主要在孕中期和孕晚期;孕晚期DEHP暴露可降低雄性子代的记忆能力。
【学位单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R114;R715.3
【部分图文】：

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图 1 Morris 水迷宫参考示意图Fig 1 Morris water maze reference diagram学改变盘组织置于 4%多聚甲醛溶液中固定，并按照标准垂直于胎盘平面将胎盘蜡块连续切成 5μm 的切片inandEosin，H&E）染色，中性树脂封片，待树脂。每组至少 5 张来源不同的切片，400× 光镜下观每张切片随机选择至少 10 个不连续的视野，用 N视野血窦面积比进行统计，其计算公式为：胎盘迷血窦像素总和/整个视野的总像素。

孕鼠,孕期增重,饲料消耗

15P 暴露对孕鼠饲料消耗和孕期增重的影响。三组孕鼠从 GD0理（0、50、200mg/kg），每天称量孕鼠饲料消耗量和孕鼠体体重；（C）孕鼠增重。所有资料均以平均值±标准误的形式表HP exposure during pregnancy on consumption of food and weighonsumption. (B) Change of maternal body weight. (C) Maternal EHP 暴露对孕鼠妊娠结局的影响

胎鼠,体重,孕鼠

图 3 全孕期 DEHP 暴露对胎鼠体重和头臀长的影响。三组孕鼠从 GD0 到 GD17 每天给予 DEHP灌胃处理（0、50、200 mg/kg），GD18 早上剖杀，辨认胎鼠性别及称量体重。（A）总胎鼠体重；（B）雄性胎鼠体重；（C）雌性胎鼠体重；（D）总胎鼠头臀长；（E）雄性胎鼠头臀长；（F）雌性胎鼠头臀长。所有资料均以平均值±标准误的形式表示（ x ±SEM），N=12-17。Fig 3 Effects of maternal DEHP exposure throughout pregnancy on fetal weight and crown-rumplength. (A-C) Body weight of fetuses; (D-F) Crown-rump length was measured. (N = 12 17). *P <0.05.3.2 DEHP 暴露所致 IUGR 的时间窗3.2.1 不同孕期 DEHP 暴露对孕鼠饲料消耗和体重的影响与对照组相比，DEHP 处理组的孕鼠饲料消耗量均未发生明显变化，差异无统计学意义（P＞0.05），见图 4A；与对照组相比，DEHP 处理组孕鼠的孕期体重未

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