SRSF10调控IL1RAP可变剪接促进宫颈癌的形成

发布时间：2020-09-29 19:26

　　目的:HR-HPV病毒E6E7蛋白是诱发宫颈癌的主要始动因素,但仅HPV感染并不足以致癌,需要其他促癌因素的共同作用。在肿瘤中多存在剪接因子的异常表达,肿瘤的十大典型生物学行为均涉及基因的异常可变剪接。那么,可变剪接是否作为E6E7的“同谋”在宫颈癌变过程中发挥作用?考虑到HR-HPV感染及异常可变剪接在肿瘤发生中的重要作用,本课题拟探究HR-HPV感染、可变剪接与宫颈癌间的关系,深化对HR-HPV致宫颈癌机制的认识并探究靶向可变剪接以治疗宫颈癌的可能。内容及方法:1)利用RNAi技术在HPV16/18阳性的宫颈癌细胞系中干扰E6E7表达并进行全基因表达谱分析及PCR验证,探究E6E7是否调控剪接因子的表达并筛选出变化最显著者SRSF10。2)利用Oncomine等数据库分析剪接因子SRSF10在宫颈癌中的表达,并进行IHC验证;构建shSRSF10宫颈癌稳转株,建立裸鼠移植瘤模型,观察SRSF10在宫颈癌中的功能。3)利用ChIP及双荧光素酶报告基因技术验证转录因子E2F1与SRSF10启动子区的结合;干扰E2F1,利用WB技术检测E2F1对SRSF10表达的调控,明确E6E7上调SRSF10的具体机制。4)利用TCGAspliceseq、CLIP-seq数据分析SRSF10调控的可变剪接靶基因;干扰SRSF10,利用PCR、RNA-seq及CLIP技术验证SRSF10对靶基因可变剪接的调控。5)利用双荧光素酶报告基因、WB、ChIP及IHC等技术证明SRSF10介导IL1RAP可变剪接对IL1β-NF-κB通路及下游免疫检查点分子CD47的调控,探究SRSF10调控IL1RAP可变剪接促进宫颈癌进展的分子机制。结果:1)干扰E6E7后,19个核心剪接因子表达下调,其中以剪接因子SRSF10下调最为显著。2)SRSF10在宫颈癌中表达上调且与HPV感染有关,干扰SRSF10可抑制宫颈癌细胞的成瘤能力。3)转录因子E2F1结合SRSF10启动子区,促进SRSF10的转录激活上调SRSF10的表达。4)SRSF10调控IL1RAP的可变剪接促进mIL1RAP的产生。mIL1RAP参与SRSF10的促癌作用。5)SRSF10介导的IL1RAP可变剪接通过调控IL1β-NF-κB通路上调免疫检查点分子CD47的表达,从而抑制巨噬细胞对宫颈癌细胞的吞噬。结论:HR-HPV E6E7通过E2F1促进剪接因子SRSF10的转录激活,上调其表达。SRSF10介导IL1RAP可变剪接通过调控IL1β-NF-κB通路上调免疫检查点分子CD47的表达,抑制巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬,促进宫颈癌的形成。
【学位单位】：上海交通大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R737.33
【部分图文】：

死亡率,全球,宫颈癌,不发达国家

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，占女性恶性肿瘤发病率及死亡率的第四位（图1）。宫颈癌每年新增病例 53 万例，其中几乎 85%发生于不发达国家及发展中国家[2]；每年死亡病例 27万例，不发达国家及发展中国家的死亡率是发达国家的 18 倍[3]。中美、南美、加勒比海、南非及南亚地区为宫颈癌主要高发区[4]。在我国，宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤（图 2），其年龄标准化发病率（Age-standardized Incidence Rate，ASIR）逐渐升高[6]。据最新的流行病学数据显示，城市及农村地区的 ASIR 分别为10.1/10 万和 10.5/10 万[7]。宫颈癌发病呈年轻化趋势，45-49 岁为宫颈癌的好发年龄。宫颈癌地域差异明显

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11的趋势[6]。据统计，2015 年共计 2.64 万人死于宫颈癌[92.4/10 万和 2.9/10 万[8]。宫颈癌死亡的高峰年龄为 85 西部及东部地区。因此，中西部地区和农村地区仍是我图 2 女性高发恶性肿瘤(2015,中国)[5]Fig 2 Most common tumors of the females（2015, China）[5]

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8re及非编码长控制区（Non-coding long control region, LCR）白被认为是宫颈癌的主要致癌蛋白[13]。E6 通过泛素依赖通过与 pRb 家族成员（p107 和 p130）相互作用，竞争 p结合，使 E2F 释放，进而导致一系列肿瘤相关基因的转1.3 宫颈癌是多因素、多阶段的病理过程宫颈癌并非 HR-HPV 感染的直接结果，需要其他促素、多阶段共同作用的病理过程[16]。因此，改善宫颈癌上促进宫颈癌的发生的具体机制。近期研究表明，慢性炎颈上皮癌变的过程中发挥着关键作用[17-19]。慢性炎症是肿环境的炎症状态可破坏机体免疫系统，阻止免疫系统对[21图 3 E6E7 为 HPV 的主要致癌蛋白[14]Fig 3 E6E7 are the major oncoproteins of HPV[14]

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