RACK1对宫颈癌SiHa细胞增殖及凋亡能力的影响

发布时间：2020-09-29 21:04

　　 目的:RACK1是一种游离于细胞中的支架蛋白,参与细胞中多种生化反应,影响细胞的生物学功能。课题组前期相关研究证实,在宫颈癌组织中RACK1蛋白的表达升高,且在正常组织、宫颈上皮内瘤变I、II、III级及宫颈癌组织中呈正相关,故本实验拟在通过体外细胞实验初步研究体外RACK1的表达上调后对于SiHa细胞增殖、凋亡能力的影响,为进一步探讨RACK1在宫颈癌疾病发生发展及其预后中的相关作用机制奠定一定的基础。方法:选取上海细胞库提供的人SiHa细胞株进行传代培养,通过脂质体法将RACK1过表达质粒及空白质粒分组进行转染,并利用RT-qPCR测定各组细胞转染后RACK1蛋白的mRNA的相对表达量,利用Western-Blot法测定各组细胞中RACK1蛋白的相对表达量,获得稳定高表达RACK1的SiHa细胞株,然后采用CCK-8法,利用酶标仪连续测量转染后各组细胞的吸光度,以此来比较各组细胞增殖情况;最后采用流式细胞仪检测细胞的凋亡变化情况。利用SPSS16.0软件进行统计资料的分析处理。结果:1.RACK1过表达质粒组测得的mRNA的相对表达量为1.25±0.59,分别与空白质粒转染组(0.71±0.12)、未转染组(0.66±0.07)相比,含量明显升高(P0.05);2.过表达质粒组RACK1蛋白的相对含量(0.94±0.08)高于其他2组,差异具有统计学意义(P0.05);但空白质粒组(0.74±0.07)与未处理组(0.72±0.09)的RACK1的相对含量之间无显著性差异;3.RACK1的过表达可以促进宫颈癌SiHa细胞的生长增殖,通过CCK-8法连续测量各组细胞吸光度,并对其比较,可见过表达质粒组细胞生长增殖速度明显高于其他两组(P0.05);4.RACK1的过表达可以抑制宫颈癌SiHa细胞的凋亡。通过流式细胞仪对转染后各组细胞凋亡率测定。过表达质粒组细胞凋亡率(5.70±1.47)低于空白质粒转染组(15.73±1.28)及未转染组(17.37±3.01)(P0.05)。结论:1.在体外成功构建RACK1过表达的宫颈癌Si Ha细胞株;2.RACK1蛋白的过表达在体外可促进宫颈癌Si Ha细胞的增殖,抑制细胞凋亡,提示其对宫颈癌疾病发生发展有一定的促进作用。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R737.33
【部分图文】：

转染后各组细胞中 RACK1 的 mRNA 表达转染后 3 组中 RACK1 蛋白 mRNA 表达的差异采用单因素方差结果显示（图 2-1）：转染后 RACK1 过表达组中 RACK1 蛋白其他 2 组，差异有统计学意义，P＜0.05。但空白质粒数值与未意义（表 2-1）。表 2-1 转染后各组别中 RACK1 蛋白 mRNA 的表达（ 组别 mRNA 相对表达量 F 值 未转染细胞组 0.66±0.07 415.025 空白质粒转染组 0.71±0.12RACK1 过表达质粒组 1.25±0.59aba与未转染细胞组相比,P＜0.05；b与空白质粒转染组相比,P＜0.05。

因素方差分析（SNK）法对 3 组整体的差异进行统计分析，结果的相对含量的差异具有统计学意义（P＜0.05）。组内差异采用单D 法）进行统计分析，结果显示：过表达质粒组 RACK1 蛋白的相组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；但空白质粒组与未处理组的之间无显著性差异。（表 2-2、图 2-2）表 2-2 转染后各组别中 RACK1 蛋白的相对表达量（ ±S）组别 RACK1 蛋白表达量 F 值 P 值转染细胞组 0.72±0.09 62.848 0.00白质粒转染组 0.74±0.07K1 过表达质粒组 0.94±0.08aba与未转染细胞组相比,P＜0.05；b与空白质粒转染组相比,P＜0.05。Xern-Blot 法测定各组细胞的 RACK1 蛋白的相对表达量

2）第 1 天 3 组之间细胞的 OD 值差异无统计学意义；第 2 天 3 组细胞的增长的趋势，但 RACK1 转染组吸光度增长快与空白质粒及未转染组，差意义，P 均＜0.05。但空白质粒数值与未转染组差异无统计学意义。3）从第 1 天开始到第 5 天结束，各个时间点的细胞的 OD 值均成增长的趋势统计学意义，P 均＜0.05。表 2-3 连续 5 天测量各组细胞的生长（ ±S）day1 day2 day3 day4 day组 0.45±0.03 0.67±0.01 0.89±0.05 1.05±0.01 1.25±粒转染组 0.48±0.37 0.69±0.05 0.94±0.02 1.12±0.07 1.33±1 转染组 0.49±0.06 0.80±0.03 1.39±0.24 2.16±0.11 2.21± 0.303 0.000 0.000 0.000 0.0X

【参考文献】

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本文编号：2830255