GNPs、CSP-GNPs的制备及其对人宫颈癌SiHa细胞毒性的初步研究

发布时间：2020-10-10 08:41

　　 【目的】本实验通过制备金纳米颗粒(gold nanoparticles GNPs),并在其表面修饰宫颈癌特异性结合肽(cervical cancer specific binding peptide,CSP),合成对人宫颈癌具有靶向性的金纳米颗粒复合物CSP-GNPs,研究不同浓度GNPs、CSP-GNPs对人宫颈癌SiHa细胞存活率的影响,初步探讨其对SiHa细胞的毒性,为后续进行宫颈癌靶向放射增敏实验研究提供参考依据。【方法】(1)柠檬酸三钠还原法制备GNPs,并在室温下将末端带有半胱氨酸的CSP与GNPs以Au-S键偶联,合成CSP-GNPs复合物;并通过调节反应体系pH值、多肽溶液/金纳米颗粒溶液体积比及反应时搅拌转速,研究其对CSP-GNPs分散性及稳定性的影响;采用马尔文粒度仪、透射电子显微镜(TEM)、扫描电子显微镜(SEM)、紫外可见分光光度计(UV-Vis)等对金纳米材料进行测试与表征,电感耦合等离子发射光谱仪(ICP-AES)检测金纳米颗粒溶液中金元素浓度,傅里叶红外光谱仪、X射线光电子能谱仪(XPS)验证GNPs与CSP连接成功与否。(2)取对数生长期的人宫颈癌SiHa细胞,以含有不同浓度的GNPs、CSP-GNPs的无血清的培养液培养24h、48h后,用台盼蓝染色法检测GNPs、CSP-GNPs对SiHa的毒性作用。【结果】(1)成功制备出平均粒径大小约16.7nm的GNPs,ICP-AES测定制备的GNPs溶液中金浓度为66.3mg/L。(2)制备出分散性、稳定性均较好的CSP-GNPs复合物。(3)不同浓度的GNPs及CSP-GNPs对SiHa细胞增殖无明显抑制作用(P0.05)。【结论】(1)柠檬酸三钠还原法制备的GNPs稳定性、分散性好,粒径大小易调控。(2)成功合成稳定性及分散性好的CSP-GNPs复合物。(3)浓度小于0.336mmol/L的GNPs、CSPGNPs对人宫颈癌SiHa细胞无明显细胞毒性。
【学位单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R737.33
【部分图文】：

金纳米颗粒（GNPs）的制备 所有玻璃实验仪器及磁力搅拌子均需王水浸泡 6h 后在避光环境中（四氯金酸水合物不稳定）。 磁力搅拌器通电后，调节转速(300r/m）及加热温度蛇形冷凝管及橡胶管连接形成冷凝回流装置，冷凝管口接橡胶排水管。 向锥形平底烧瓶加入 25mL 三蒸水，放入磁珠，连接冷，边加热磁珠边搅拌，接着向锥形平底烧瓶中加入 0.液体沸腾持续 10min 后迅速加入 2.5mL 34mmol/L 柠檬沸腾并持续 10min，停止加热，磁珠继续搅拌反应溶液 制备后的 GNPs 溶液用 0.22um 过滤器过滤并于棕色瓶 马尔文纳米粒度仪检测 GNPs 粒径大小、TEM 观察其形吸收光谱，ICP-AES 检测 GNPs 溶液中金浓度。

图 3.2 Cys-CSP 的化学结构图2） 多肽的溶解：从-20℃冰箱中取出多肽，常温放置 20mi心管管底，缓慢打开盖子，加入 980uL 三蒸水溶解，再加入摇匀，溶解浓度为 1mg/mL，置于 4℃冰箱备用。3） 取上述方法制备的金纳溶液 3mL 放至 3 个 1.5mL 离心管高速离心机中，8000r/m 离心重悬 5min，去上清液后重悬，酒红色物质沉于管底，弃去淡红色液体,加入 900uL 三蒸水心管内加入 100uL 100umol/L、10umol/L、1umol/L 多肽溶 2h，取样检测其红外光谱及 X 射线光电子能谱图。 影响 CSP-GNPs 稳定性、分散性的研究1） pH 值的影响：将 12 管 1 mLGNPs 溶液，高速离心去除上uL pH 值为 5-12 的水溶液重悬，后再加入 100 umol/L 的CSP

GNPs透射电子显微镜图

【相似文献】

相关硕士学位论文 前1条

1 李超;GNPs、CSP-GNPs的制备及其对人宫颈癌SiHa细胞毒性的初步研究[D];南华大学;2019年

本文编号：2834985