人黑色素瘤抗原A3在宫颈癌组织和细胞中的表达研究

发布时间：2020-10-14 07:23

　　 目的:深入研究黑色素瘤相关抗原A3(melanoma-associated antigen-A3,MAGE-A3)基因在宫颈癌组织、宫颈癌细胞株Hela、SiHa、C-33 A及正常宫颈细胞株End1/E6E7中的表达情况,探讨肿瘤特异性抗原MAGE-A3作为宫颈癌免疫治疗特异性靶位的可能性,并为进行机制性研究提供模型和奠定基础。方法:选取河北大学附属医院妇科2015年1月至2017年1月间首诊并行妇科手术患者的宫颈组织。收集存档蜡块标本,其中正常宫颈组织20例,宫颈癌组织40例。所有病例均需经病理诊断证实,所有患者均排除患其他恶性肿瘤疾病或急慢性疾病。同时培养宫颈癌细胞株HeLa、SiHa、C-33 A及作为正常对照的细胞株End1/E6E7。应用免疫组织化学SP法检测MAGE-A3在40例宫颈癌组织和20例正常宫颈组织中的表达。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测MAGE-A3 mRNA在三种不同宫颈癌细胞株及正常宫颈细胞株中的表达情况。应用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测MAGE-A3蛋白在三种不同宫颈癌细胞株(HeLa、SiHa和C-33 A)及正常宫颈细胞株(End1/E6E7)中的表达水平。结果:1.免疫组化法显示:MAGE-A3主要表达于细胞质中,呈浅黄色至棕褐色。MAGE-A3在正常宫颈组织和宫颈癌组织中阳性表达率分别为0%(0/20)和70%(28/40)。在20例正常宫颈组织中MAGE-A3均呈阴性表达,在40例宫颈癌组织中28例呈阳性表达,12例呈阴性表达。宫颈癌组表达高于正常宫颈组,差异有统计学意义(χ~2=26.25,P0.05)。2.实时荧光定量PCR法显示:以GAPDH mRNA为内参照标准,检测基因MAGE-A3的mRNA水平结果显示,End1/E6E7、HeLa、SiHa、C-33 A的相对定量值分别为0.124±0.003、0.973±0.004、0.902±0.030与0.943±0.017。MAGE-A3 mRNA的相对表达量在宫颈癌细胞组中明显高于正常宫颈细胞组,经统计学分析发现,宫颈癌细胞组与正常宫颈细胞组间差异有统计学意义(P0.05),而三种宫颈癌细胞之间差异无统计学意义(P0.05)。3.Western bloting蛋白印迹显示:检测宫颈细胞中MAGE-A3蛋白表达水平结果显示,MAGE-A3蛋白在三株宫颈癌细胞和正常宫颈细胞中的表达与mRNA相似,End1/E6E7、HeLa、SiHa、C-33 A的相对灰度值分别为0.094±0.029、1.005±0.056、0.975±0.026与0.984±0.032,宫颈癌细胞组中的MAGE-A3蛋白的相对表达量均明显高于正常宫颈细胞,经统计学分析发现,宫颈癌细胞组与正常宫颈细胞组间差异有统计学意义(P0.05),而三种宫颈癌细胞之间差异无统计学意义。结论:MAGE-A3在宫颈癌组织和宫颈癌细胞中高表达,提示在宫颈癌的发生发展中MAGE-A3可能具有重要作用。可见,MAGE-A3有可能成为宫颈癌免疫治疗的理想靶点,也能帮助宫颈疾病的早期诊断。未来,利用其制备多基因联合修饰的肿瘤基因工程疫苗,精确地诊断、判断预后,并且在肿瘤疾病中做功能性靶向治疗等值得期待。所以,研究MAGE-A3基因对进一步了解宫颈癌细胞的生物学行为及判断预后有很重要的临床应用价值。
【学位单位】：河北大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R737.33
【部分图文】：

织化学 SP 法检测宫颈组织中 MAGE-A3 的表性表达主要于细胞质中，呈浅黄色至棕褐色（图 1、图组织中阳性表达率分别为 0%（0/20）和 70%（28/40）E-A3 均呈阴性表达，在 40 例宫颈癌组织中 28 例呈阳性宫颈癌组表达高于正常宫颈组，差异有统计学意义（2χ表 3-1 宫颈组织中 MAGE-A3 蛋白表达的阳性比例类别 例数 MAGE-A3 蛋白的表达 阳性率阴性 阳性常宫颈 20 20 0 0%颈癌 40 12 28 70%

图 3-2 宫颈癌组织中 MAGE-A3 蛋白的表达，SP ×20R 检测宫颈细胞中 MAGE-A3 mRNA 的表达 mRNA 为内参照标准，RT-PCR 检测基因 MAGE-A3 的进行统计学分析。结果显示，End1/E6E7、HeLa、SiHe quantificaton，RQ）分别为 0.124±0.003、0.973±0.004 3）。MAGE-A3 mRNA 的相对表达量在宫颈癌细胞组统计学分析发现，宫颈癌细胞组与正常宫颈细胞组间差三种宫颈癌细胞之间差异无统计学意义（P＞0.05）。

第三章 结果白印迹法检测宫颈细胞中 MAGE-A3 法检测宫颈细胞中 MAGE-A3 蛋白表达水平结颈癌细胞和正常宫颈细胞中的表达与 mRNA 相、C-33 A 的相对灰度值分别为 0.094±0.029、12（图 5），宫颈癌细胞组中的 MAGE-A3 蛋白，经统计学分析发现，宫颈癌细胞组与正常宫，而三种宫颈癌细胞之间差异无统计学意义。HeLa SiHa C-33A End1/E6E7
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本文编号：2840372