棕榈酸经PPARα调控SR-BI影响卵巢颗粒细胞脂质蓄积

发布时间：2020-10-24 00:53

　　 背景:多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是一种女性常见的代谢性疾病,其主要的临床特征包括高雄激素血症、持续无排卵、卵巢多囊样改变。大量研究发现,80%的多囊卵巢综合征患者伴随着脂质异常,其中,棕榈酸(palmitic acid,PA)的浓度在血液和卵泡液中也增加,棕榈酸浓度的增加引起颗粒细胞脂质毒性,但棕榈酸是否促进颗粒细胞脂质蓄积尚不明确。B类I型清道夫受体(scavenger receptor class B type I,SR-BI)是细胞上的膜受体,主要参与脂质转运,SR-BI的表达变化与不孕密切相关。此外,在肝细胞中,过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferators-activated receptorα,PPARα)调控SR-BI的表达,而在颗粒细胞中脂质代谢异常与PPARα/SR-BI的关系还尚不清楚。目的:本研究旨在探讨棕榈酸通过PPARα调控SR-BI影响卵巢颗粒细胞脂质蓄积的作用。方法:1.人卵巢颗粒细胞(KGN)用含有10%胎牛血清的DMEM培养液于37°C、5%CO_2培养箱中静置培养,不同浓度(0,100,200,300μmol/L)的棕榈酸处理24 h,油红O染色观察细胞内脂滴数量,NBD-Cholesterol荧光标记表示细胞内胆固醇含量;Western-blot、免疫细胞化学和免疫荧光分别检测细胞PPAR-α,SR-BI蛋白质的表达。2.干预SR-BI后,采用油红O染色和NBD-Cholesterol荧光标记观察细胞内脂质含量。3.干预PPAR-α,采用油红O染色和NBD-Cholesterol荧光标记观察细胞内脂质含量,Western-blot、免疫细胞化学和免疫荧光检测卵巢颗粒细胞SR-BI表达。结果:1.不同浓度棕榈酸处理后,与对照组相比,颗粒细胞内脂质含量增加,且呈浓度依赖性;与对照组相比,颗粒细胞SR-BI的表达上调,且呈浓度依赖性(P﹤0.05);与对照组相比,颗粒细胞PPARα的表达上调,仅在200、300μmol/L棕榈酸处理组有统计学意义(P﹤0.05)。2.SR-BI抑制剂BLT-1处理后,与对照组相比,棕榈酸组颗粒细胞内脂质含量增加,与棕榈酸组相比,棕榈酸与BLT-1共孵育组颗粒细胞脂质含量减少。3.PPARα抑制剂GW6471处理后,与对照组相比,棕榈酸组颗粒细胞内脂质含量增加,与棕榈酸组相比,棕榈酸与GW6471共孵育组颗粒细胞内脂质含量减少;与对照组相比,棕榈酸组颗粒细胞SR-BI的表达上调(P﹤0.05);与棕榈酸组相比,棕榈酸与GW6471共孵育组颗粒细胞SR-BI的表达下调(P﹤0.05)。结论:1.棕榈酸促进卵巢颗粒细胞脂质蓄积;2.PPARα介导棕榈酸调控SR-BI蛋白的表达影响卵巢颗粒细胞脂质蓄积。
【学位单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R711.75
【部分图文】：

为观察棕榈酸对KGN细胞内脂质的影响，我们采用不同浓度(0、100、200、300μmol/L)处理KGN细胞，油红O染色法检测细胞内脂滴数量。结果发现，与对照组相比，胞内脂滴数量增加，且呈浓度依赖性(图4.1)，这个结果提示，棕榈酸促进KGN细胞脂质蓄积。图 4.1 油红 O 染色检测棕榈酸对 KGN 细胞脂质含量的影响(×400)Control:对照组,100 μmol/L PA：100 μmol/L 棕榈酸组,200 μmol/L PA:200 μmol/L 棕榈酸组,300 μmol/L PA:300 μmol/L 棕榈酸组.此外，为了观察 KGN 细胞内脂质含量的变化，我们采用不同浓度(0、100、200、300 μmol/L)处理 KGN 细胞，用 NBD-Cholesterol 孵育 KGN 细胞后，荧光显微镜下观察细胞内荧光的强度，结果发现细胞内绿色荧光强度增强，且呈浓度依赖性(图 4.2)。这些结果也提示

图 4.2 荧光标记胆固醇检测棕榈酸对 KGN 细胞脂质含量的影响(×200)trol:对照组,100 μmol/L PA:100 μmol/L 棕榈酸组,200 μmol/L PA:200 μmol/L 棕组,300 μmol/L PA:300 μmol/L 棕榈酸组.棕榈酸对 KGN 细胞 SR-BI以及 PPARα的影响.1 棕榈酸上调 KGN 细胞 SR-BI的表达GN 细胞脂质转运是受多种基因及蛋白调控的复杂过程，其中 S胞胆固醇转运的关键蛋白。为进一步深入探讨棕榈酸促进 KGN的作用机制，我们将 KGN 细胞用不同浓度的棕榈酸(0, 1ol/L)处理 24 h，采用 Western blot 的方法检测 SR-BI 的表达，结果组相比，SR-BI 表达量增加,且呈浓度依赖性（图 4.3）。这些榈酸上调 KGN 细胞 SR-BI的表达。

图 4.3 Western blot 检测棕榈酸对 KGN 细胞 SR-B1 蛋白表达的影响Control:对照组,100 μmol/L PA:100 μmol/L 棕榈酸组,200 μmol/L PA:200 μmol/L 棕榈酸组,300 μmol/L PA:300 μmol/L 棕榈酸组,(n=3).*P < 0.05, Control vs 100μmol/L PA,** P < 0.01Control vs 200μmol/L PA or 300μmol/L PA 组.此外为了验证棕榈酸对卵巢颗粒细胞 SR-BI 表达的影响，我们将 KGN 细胞用不同浓度的棕榈酸(0, 100, 200, 300μmol/L)处理 24 h，采用免疫细胞化学的方法检测 SR-BI 的表达，结果发现，与对照组相比，细胞膜上标记 SR-BI 的棕褐色增加，且呈浓度依赖性(图 4.4)。这些结果也提示，棕榈酸上调 KGN 细胞SR-BI 的表达。
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本文编号：2853785