咖啡因通过促进细胞自噬抑制小鼠胎胸腺发育的初步研究

发布时间：2021-03-24 12:54

　　研究背景:流行病学调查提示,孕期不良因素（如饮酒、药物等）暴露可导致胚胎器官发育不良,子代幼年及成年心血管、免疫及代谢系统疾病易感性增加。本室前期研究证实,孕期咖啡因暴露可抑制胎胸腺发育,导致胎胸腺初始T细胞输出减少,子代成年后免疫功能紊乱及免疫相关疾病（如哮喘,1型糖尿病等）易感性增加。然而,孕期咖啡因暴露如何抑制胎胸腺T细胞输出亟待进一步研究。已知咖啡因可诱导肝星形细胞、骨骼肌细胞等发生自噬,而细胞自噬与胸腺细胞发育密切相关。因此,本研究拟从细胞自噬角度阐明孕期咖啡因暴露对胎胸腺细胞发育的影响及其分子机制。目的:观察孕期咖啡因暴露对胎胸腺细胞发育表型的影响,探讨细胞自噬在胎胸腺细胞发育中的作用,进一步阐明咖啡因调控细胞自噬的分子机制。方法:（1）动物实验观察孕期咖啡因暴露对胎胸腺细胞表型及自噬的影响:受孕小鼠随机分为对照组和咖啡因组,咖啡因组孕鼠于孕9天（gestational day 9,GD9）开始灌胃给予咖啡因（96mg/kg/d,每天给药两次,早晚各一次）,持续至生产,正常对照组给予等体积生理盐水。于孕18天（gestational day 18,GD18）剖腹取胎鼠,记录... 

【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．孕期咖啡因（９６?ｍｇ／ｋｇ／ｄ）暴露对孕１８日胎鼠和胎胸腺生长发育参数的影响．Ａ：胎??鼠体重；Ｂ：胎胸腺重量；Ｃ：胎胸腺指数；Ｍｅａｎ士ＳＤ，ｎ＝８－１０，与对照组相比，＊尺０．０５，??

图２．孕期咖啡因暴露（９６?ｍｇ／ｋｇ／ｄ）对孕１８日胎胸腺细胞表型和分化的影响。Ａ．胎胸腺??流式细胞典型图；Ｂ．胎胸腺各业型细胞绝对计数；Ｍｅａｎ士ＳＤ，ｎ＝３－４，与对照组相比；＊／＾０．０５。??Ｆｉｇｕｒｅ?２．?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ｐｒｅｎａｔａｌ?ｃａｆｆｅｉｎｅ?（９６?ｍｇ／ｋｇ／ｄ）?ｅｘｐｏｓｕｒｅ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｔｈｙｍｏｃｙｔｅ?ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ?ａｎｄ?ｔｈｅ??ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｆｅｔａｌ?ｔｈｙｍｕｓ?ｏｎ?ｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌ?ｄａｙ?（ＧＤ?１８）．?Ａ．?Ｔｙｐｉｃａｌ?ｆｏｗ?ｄｉａｇｒａｍｓ；?Ｂ．??Ａｂｓｏｌｕｔｅ?ｔｈｙｍｏｃｙｔｅ?ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ?ｎｕｍｂｅｒｓ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｆｅｔａｌ?ｔｈｙｍｕｓｅｓ；?ｎ＝３￣４?ｐｅｒ?ｇｒｏｕｐ?ｆｏｒ?ｔｈｅ?ｆｌｏｗ??ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ?ａｎａｌｙｓｉｓ．?＊／＊＜０．０５．?＾ｃｏｎｔｒｏｌ．??３．孕期咖啡因暴露对胎胸腺Ａ２ＡＲ／ＰＫＡ通路的影响??研究证实，Ａ２ＡＲ在胸腺细胞表面高度表达，腺苷激活Ａ２ＡＲ受体后，腺苷??酸环化酶活化，促进下游ＰＫＡ磷酸化，进一步引起细胞自噬等生物学变化。因??此，我们首先通过ＲＴ－ＰＣＲ检测孕期咖啡因暴露对Ａ２ＡＲ／ＰＫＡ通路ｍＲＮＡ水平??的影响。结果如图，咖啡因组ＰＫＡ基因表达较对照组显著降低（／Ｍ３．０５，图３?Ａ），??Ａ２ＡＲ表达未有明显变化。Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测咖啡因对ＰＫＡ活化的影响，结果显??示，孕期咖啡因暴露后，Ｐ－ＰＫＡ在组织中的含量较对照组下调２４％?（图３?Ｂ）。??

酸环化酶活化，促进下游ＰＫＡ磷酸化，进一步引起细胞自噬等生物学变化。因??此，我们首先通过ＲＴ－ＰＣＲ检测孕期咖啡因暴露对Ａ２ＡＲ／ＰＫＡ通路ｍＲＮＡ水平??的影响。结果如图，咖啡因组ＰＫＡ基因表达较对照组显著降低（／Ｍ３．０５，图３?Ａ），??Ａ２ＡＲ表达未有明显变化。Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测咖啡因对ＰＫＡ活化的影响，结果显??示，孕期咖啡因暴露后，Ｐ－ＰＫＡ在组织中的含量较对照组下调２４％?（图３?Ｂ）。??提示，孕期咖啡因暴露对胎胸腺自噬的促进作用可能通过影响Ａ２ＡＲ／ＰＫＡ通路??实现。??Ａ?Ｂ??§?１．５－１?ＣＤ?Ｃｏｎｔｒａｌ?ｃ?ｉ．ｓ－??ｇ?Ｃａｆｆｅｉｎｅ?．２??ｉｉｒｉ?ｆｎ?ｎ?．??ｉ?■?■?ｇａｐｄｈ｜＾＾＾＾｜?＿?ＩＨ??Ｅ?０．０－ＬＩ?＾＾０．０－Ｉ??，??＾???Ａ２ＡＲ?ＰＫＡ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｃａｆｆｅｉｎｅ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｃａｆｆｅｉｎｅ??图３．孕期咖啡因暴露（９６ｍｇ／ｋｇ／ｄ）对孕１８日胎胸腺细胞Ａ２ＡＲ／ＰＫＡ通路的影响。Ａ．胎??胸腺细胞?Ａ２ＡＲ?和?ＰＫＡｍＲＮＡ?表达，Ｍｅａｎ土ＳＤ，?ｎ＝１０；?Ｂ．?ｐ－ＰＫＡ?蛋白表达情况，Ｍｅａｎ土ＳＤ，??ｎ＝３？４；与对照组相比


本文编号：3097760