miRNA-125b-5p通过靶向调节Pak3/ERK信号通路影响多囊卵巢综合征卵泡激素合成

发布时间：2021-04-09 05:55

　　背景:多囊卵巢综合征最主要的特征之一是雄激素、雌激素合成异常。微小RNA（miRNA）是内源性非编码RNA,在多种生物过程中发挥重要作用。前期研究提示PCOS患者外周血清中miR-125b-5p表达明显降低,但其调控卵泡激素生成的内在分子机制尚不清楚。方法:检测PCOS患者及健康对照组人群血清中的miR-125b-5p表达水平的差异。体外分离培养小鼠窦前卵泡,对miR-125b-5p抑制或过表达后检测靶基因Pak3、ERK磷酸化水平、下游甾体激素合成酶以及睾酮、雌二醇的变化。通过荧光素酶报告基因实验,验证miR-125b-5p和Pak3间的直接靶向调节。联合应用miR-125b-5p抑制剂及Pak3抑制剂,开展挽救试验,同时检测POCS患者及对照组卵巢组织中Pak3的表达水平,再次验证miR-125b-5p调节雄激素生成的分子机制。结果:miR-125b-5p在高雄激素PCOS患者血清中的表达水平显著下降。在小鼠窦前卵泡中,抑制miR-125b-5p的表达,雄激素合成相关基因如CYP17A1、CYP11A1的表达上调从而促进雄激素的分泌,雌激素合成相关基因如CYP19A1、及雌激素的水... 

【文章来源】：南京医科大学江苏省

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

miR-125b-5p在PCOS高雄激素血症妇女血清中表达减少

图 3.miR-125b-5p 通过靶向于 Pak3 的 3'UTR 负向调控 Pak3 的表达(A) 通过在线 miRNA 靶基因预测软件，Pak3 3’UTR 包含 miR125b-5p 的结合位点。(B)转染 miR125b-5p 抑制剂后检测 Pak3 的 mRNA 水平。(C)转染 miR125b-5p 抑制剂后检测 Pak3 的蛋白水平。(D,E)转染 miR125b-5p 类似物后检测 Pak3 的 mRNA 及蛋白水平。(F)miR125b-5p 和 Pak3 的 3’UTR 的序列比对。Pak3 的突变型 3’UTR(下划线标记的 CCU)用来构建突变型荧光报告载体。野生型和突变型 3’UTR 分别克隆至 pGL3 荧光素酶报告载体上。(G)荧光素酶报告分析显示，过表达 miR125b-5p 能抑制野生型 3’UTR组的荧光素酶活性，而不影响突变组的活性。*p<0.05。4、抑制 Pak3 的表达影响小鼠卵泡中激素合成相关基因的表达以及睾酮、雌二醇的分泌

南京医科大学硕士学位论文进一步研究 Pak3 在卵泡中激素合成相关基因的表达以及睾酮、雌二醇的分泌中的作用。与如图 4A 所示，与对照组相比，HA-PCOS 中 Pak3 的 mRNA 水平明显增加，其蛋白水平呈现相同的趋势(图 4B)。，使用 Pak3 抑制剂处理卵泡，进一步探讨 Pak3 在卵泡类固醇激素合成中作用。结果显示小鼠卵泡中 Pak3 抑制后，显著降低了 LHCGR, CYP11A1 and CYP17A1 的表达，睾酮分泌减少(图4C、E 和 F)；相反，雌激素相关基因以及雌二的分泌显著增加(图 4D、E 和 F)。因此，我们得出相关结论：Pak3 在卵泡激素合成中的作用与 mir-125b-5p 相反，促进了睾酮的释放同时减少雌二醇的产生。


本文编号：3127049