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miR-135b-3p靶向ROBO1促进人卵巢癌侵袭转移关系的研究

发布时间:2021-07-08 22:35
  背景卵巢癌是女性死于恶性妇科肿瘤的常见病因,它的致死性主要是由于疾病早期不易被发现以及对终末期或复发性患者因体内广泛的肿瘤浸润和转移导致患者最终难以得到有效治疗所致。MicroRNA可参与肿瘤细胞的癌变,增殖,凋亡,转移,侵袭,和耐药性的产生,并有相关文献报道其可以扮演原癌基因或抑癌基因不同的角色。我们的前期实验显示卵巢良性组织中的miR-135b-3p表达量明显低于卵巢肿瘤组织。因此,我们提出猜想miR-135b-3p基因是否也如其在胰腺癌,大肠癌等相关文献报道中一样发挥癌基因的作用,可促进卵巢癌细胞侵袭转移及调控上皮-间质细胞转化(EMT)相关蛋白的表达,是否可以成为卵巢癌血清学诊断有价值的早期标志物。本实验主要探讨研究miR-135b-3p在增强上皮性卵巢癌增殖,侵袭转移,上皮-间质细胞转化中的作用和机制。本课题的主要研究内容包括以下三个方面:一.miR-135b-3p在上皮性卵巢癌组织中的表达及其与不同临床病理特征的相关性二.miR-135b-3p在OVCAR-3、CAOV-3细胞中的表达及对卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响三.miR-135b-3p促进卵巢癌细胞侵袭和转移的相... 

【文章来源】:南方医科大学广东省

【文章页数】:76 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

miR-135b-3p靶向ROBO1促进人卵巢癌侵袭转移关系的研究


图1-】.卵巢良性组织10例,卵巢癌组织28例中has-miR-135b-3p的平均表达量(1.45土??0.20)?,?95%的置信区间(0.072,?0.832),差异具有统计学意义=2.03,?p=0.021)??

蛋白,细胞,基因,荧光


1.5-1?OVCAR-3?E3?inhibitor?NC?2.5 ̄|?CAOV-3?E23?inhibitor?NC??■55?□?inhibitor?-5?□?inhibitor????-r?孟20?徽??I10'?S?115圓州??f。,in?陶?**?I10?in?in??漫議?_n?105?■?議??oo-i ̄??——_?〇?0?j_【???》],』—?L?-?-a?1?——??p-ERK?MM?P-9?p-ERK?MM?P-9??图3-4a、3-4b.低表达miR-135b-3p对OVCAR-3和CAOV-3细胞中MMP-9蛋白表达的影??响(**p<0.01、…/K0.001)??Figure?3-4a^?3-4b.Effect?of?low?expression?of?miR-135b-3p?on?MMP-9?protein?expression?in??OVCAR-3?and?CAOV-3?cells?(*,<0?01、**><0.001?)??3.2.4双荧光素酶活性检测验证ROUOl是miR-135b-3p的靶基因??探讨miR-135b-3p促进卵巢癌侵袭转移的具体作用机制,采用双荧光素酶报??告基因检测验证ROBOl为miR-135b-3p下游靶基因,支持miR-135b-3p与??ROBOl直接结合的观点。根据miR-135b-3p与targeting基因预测,设计祀基因??ROBOl-3'UTR荧光素酶表达载体(WT)及其突变载体(Mut)。检测结果发现??miR-135b-3p与基因ROBOl的3'-UTR之间的结合位点如图3-5a所示。因此,??我们

突变型,共转染,野生型,荧光


?硕士学位论文???4〇_?Hi?mimic?NC+WT??■f?30-?t=.?mimic?NC+MUT??亏?_?自?r^i?1=1?miRNA+wT??2?2〇-?■?1?1?miRNA+MUT??|?.-I?.??。丨_?If?,丨r??图3-6.将野生型ROBOl?3UTR或突变型ROBOl与miR-135b-3p或mimic-NC共转染到??HEK293T细胞.48小时后测量相对荧光素酶活性。(*V〈〇.〇l)??Figure?3-6.Co-transfection?of?wild-type?ROBOl?3'UTR?or?mutant?ROBOl?with?miR-135b-3p?or??mimic-NC?into?HEK293T?cells.?After?48?hours?the?relative?luciferase?activity?was?measured.?(**p??<0.01)??3.2.5血清中miR-135b-3p在卵巢癌患者组与健康人组中的表达水平??使用qRT-PCR法检测卵巢癌患者组和健康人组血清中的miR-135b-3p表达??水平(图3-7),采用2-AACT方法,以秀丽隐杆线虫微RNA?(Cel-miR-39)进行标准??化,A?ACT=?(CTmiRNA-CTcel-miR-39?)卵肢9'者—(CTmiRNA-CT?cel-miR-39)正*.人。经检验2?AA??口数据结果属于偏态分布,采用Mann-Whitney检验,显示26例卵巢癌患者血清??中miR-135b-3p的秩均值为38.40;?26例健康人血清中miR-135b_3p的秩均值为??14.60


本文编号:3272454

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