ARRDC3对子痫前期中滋养层细胞侵袭的调控作用及机制分析

发布时间：2021-09-25 11:51

　　为了考察ARRDC3在子痫前期发生过程中的可能作用,以及其对滋养层细胞侵袭的调控作用及机制。本研究通过RT-PCT、Western Blotting和免疫组化检测了20例严重子痫前期患者和20例正常妊娠妇女的胎盘组织中ARRDC3的表达,并检测了脂多糖（LPS）诱导的子痫前期大鼠胎盘和滋养层细胞系HTR-8/SVneo中的ARRDC3表达。使用过表达ARRDC3的pcDNA3.1-HA质粒或靶向ARRDC3的siRNA转染HTR-8/SVneo细胞,通过Transwell实验考察了ARRDC3对细胞侵袭能力的影响。使用RT-PCT或Western Blotting检测细胞中JunB、FosB、NF-κBp65、MMP-2和TIMP-2的表达。结果显示,ARRDC3在重度子痫前期患者胎盘中的表达水平明显高于正常胎盘（p<0.05）。LPS处理上调了子痫前期大鼠胎盘和HTR-8/SVneo细胞中的ARRDC3表达（p<0.05）。过表达ARRDC3抑制了HTR-8/SVneo细胞的侵袭能力,下调了MMP-2的表达并上调了TIMP-2的表达（p<0.05）。下调ARRDC3... 

【文章来源】：基因组学与应用生物学. 2020,39(07)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

ARRDC3在正常胎盘和重度子痫前期胎盘中的表达

为了研究ARRDC3是否参与滋养层细胞内LPS诱导的先天性免疫激活，本研究观察了LPS刺激后HTR-8/SVneo细胞中ARRDC3的表达变化。q RT-PCR和Western Blotting检测结果显示，LPS刺激后，ARRDC3的m RNA和蛋白水平以时间依赖性方式升高(图3A),HTR-8/SVneo细胞中ARRDC3的m RNA和蛋白水平也以LPS浓度依赖性方式升高(图3B)。1.4 ARRDC3的过表达抑制滋养层细胞的侵袭能力

滋养细胞侵袭在子宫螺旋动脉重塑中至关重要。为了评估ARRDC3在此过程中的作用，使用Transwell侵袭实验分析了ARRDC3对HTR-8/SV-neo细胞侵袭的影响。结果显示，与NC-pc DNA3.1组相比，转染过表达ARRDC3的pc DNA3.1-HA质粒(ARRDC3-pc DNA3.1组)显著增加了ARRDC3的表达，并降低了HTR-8/SVneo细胞的侵袭能力。为了深入了解ARRDC3如何调节滋养细胞的侵袭，本研究通过转染靶向ARRDC3的si RNA (si-ARRDC3组)敲低了HTR-8/SVneo细胞中内源性ARRDC3的表达。结果显示，与si-NC组细胞相比，si-ARRDC3组细胞的侵袭能力显著提高(图4;图5)。MMP-2是参与细胞通过细胞外基质侵袭的重要金属蛋白酶，是胎盘形成过程中的重要因素(Espino et al.,2017)。为了进一步考察ARRDC3的作用，本研究检测了TIMP-2的表达水平(MMP-2的内源性抑制剂)，发现ARRDC3过表达增加了HTR-8/SVneo细胞中TIMP-2的表达并降低了MMP-2/TIMP-2的比例。此外，转染ARRDC3 si RNA增加了HTR-8/SVneo细胞中MMP-2的表达并降低了TIMP-2的表达(图6)。这些结果表明，ARRDC3通过破坏MMP-2和TIMP-2之间的平衡来损害滋养细胞的侵袭。


本文编号：3409682