bFGF和BMP12基因联合修饰BMSCs后向韧带成纤维细胞分化的实验研究

发布时间：2018-05-13 02:09

  本文选题：韧带组织工程 + 骨髓间充质干细胞　； 参考：《第二军医大学》2009年博士论文

【摘要】： [摘要]目的:探索bFGF和BMP12基因的联合修饰使兔骨髓间充质干细胞向韧带成纤维细胞分化的方法。方法:(1)分离、培养兔骨髓间充质干细胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs)和韧带成纤维细胞(Ligament Fibroblast, LF),通过细胞学和分子生物学方法对两种细胞进行鉴别分析;(2)构建携带人碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)基因和人骨形态发生蛋白12(bone morphogenetic protein 12 , BMP12 )基因的重组腺病毒载体Ad.bFGF-eGFP及Ad.BMP12-eGFP,并进行鉴定、扩增;(3)将Ad.bFGF-eGFP和Ad.BMP12-eGFP联合转染兔BMSCs,观察BMSCs表达、分泌bFGF、BMP12的情况,及转染后对BMSCs增殖、分化及产生韧带特异性细胞外基质的影响。结果: (1)成功分离和培养兔骨髓间充质干细胞和韧带成纤维细胞,两种细胞在细胞形态上相似,但在细胞的超微结构、增殖特性、细胞表型、细胞分子生物学水平上均有显著差异;(2)成功构建和扩增了携带人bFGF基因和BMP12基因的重组腺病毒载体Ad.bFGF-eGFP及Ad.BMP12-eGFP,其中含有eGFP荧光蛋白报告基因;(3) Ad.bFGF-eGFP和Ad.BMP12 -eGFP共转染BMSCs后,bFGF蛋白及BMP12蛋白显著表达,且明显促进BMSCs增殖和向韧带成纤维细胞表型分化,加强韧带特异性细胞外基质产生的能力并诱导韧带特异性转录因子Scleraxis的表达。结论:经Ad.bFGF-eGFP和Ad.BMP12-eGFP共同修饰改造后,兔骨髓间充质干细胞能明显向韧带成纤维细胞表型分化,韧带特异性细胞外基质的能力显著增强,为组织工程韧带的构建提供了一种更优良的种子细胞。
[Abstract]:Objective: to explore the method of combining bFGF and BMP12 gene to differentiate rabbit bone marrow mesenchymal stem cells into ligament fibroblasts. Method 1) Separation, Bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs) and ligament fibroblast cells of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) were cultured and identified by cytological and molecular biological methods to construct human basic fibroblast growth factor. The recombinant adenovirus vectors Ad.bFGF-eGFP and Ad.BMP12-eGFP of fibroblast growth factor-bFGF gene and human bone morphogenetic protein 12(bone morphogenetic protein 12 (BMP12) gene were identified. Ad.bFGF-eGFP and Ad.BMP12-eGFP were co-transfected into rabbit BMSCs to observe the expression of BMSCs and secretion of bFGF BMP12, and the effects on proliferation, differentiation and production of ligaments-specific extracellular matrix (ECM) of BMSCs after transfection. Results: rabbit bone marrow mesenchymal stem cells and ligament fibroblasts were isolated and cultured successfully. We successfully constructed and amplified the recombinant adenovirus vector Ad.bFGF-eGFP and Ad.BMP12-eGFP, which contain eGFP fluorescent protein reporter gene, and cotransfected with Ad.bFGF-eGFP and Ad.BMP12 -eGFP into BMSCs. The recombinant adenovirus vector Ad.bFGF-eGFP and Ad.BMP12-eGFP were successfully constructed and amplified after cotransfection of BMSCs with Ad.bFGF-eGFP and Ad.BMP12 -eGFP. Protein and BMP12 protein were significantly expressed, It also promoted the proliferation and differentiation of BMSCs into ligament fibroblasts, enhanced the ability of ligament specific extracellular matrix production and induced ligamental-specific transcription factor (Scleraxis) expression. Conclusion: after modification with Ad.bFGF-eGFP and Ad.BMP12-eGFP, rabbit bone marrow mesenchymal stem cells can differentiate into ligament fibroblast phenotype, and the ability of ligamenta-specific extracellular matrix is significantly enhanced. It provides a better seed cell for the construction of tissue engineering ligament.
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R329

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本文编号：1881174