ACE2基因表达增加对血管紧张素Ⅱ作用下人脐静脉内皮细胞增殖、凋亡的影响

发布时间：2018-05-24 18:37

  本文选题：血管紧张素转化酶2 + 慢病毒表达载体　； 参考：《福建医科大学》2010年硕士论文

【摘要】： 目的构建携带ACE2基因的慢病毒表达载体,观察其感染人脐静脉内皮细胞后ACE2表达增加对AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞增殖活性降低与凋亡增加的影响,初步探讨该影响的机制。 方法1.采用PCR技术从含有ACE2基因的质粒克隆模板pc-DNA3.1-hygro(+)-mACE2上钓取ACE2基因,并将ACE2基因重组到慢病毒载体表达质粒pGC-FU中,构建重组慢病毒载体表达质粒pGC-FU-ACE2,通过酶切、测序验证ACE2基因后,将pGC-FU-ACE2质粒和包装质粒pHelper1.0,pHelper2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带ACE2基因的重组慢病毒(Lentiviral-ACE2)。2.以感染复数为10(MOI=10)感染人脐静脉内皮细胞,感染72小时后通过RT-PCR,Western-blot检测各组细胞ACE2基因的转录和蛋白表达水平3. Lentiviral-ACE2感染原代培养人脐静脉内皮细胞后给予AngⅡ(终浓度10-7mol/L)处理,随机分为正常细胞组、AngⅡ组、AngⅡ+Lentiviral-GFP组和AngⅡ+Lentiviral-ACE2组,通过倒置相差显微镜观察各组HUVEC的形态学变化,AlamarBlue试剂检测各组HUVEC增殖功能,TUNEL细胞凋亡检测试剂盒检测各组HUVEC的凋亡,初步探讨ACE2发挥上述作用的机制。 结果1.成功构建携带ACE2基因的慢病毒表达载体(Lentiviral-ACE2),并获得大量高纯度的慢病毒浓缩液2.目的基因ACE2能被重组慢病毒高效地导入人脐静脉血管内皮细胞,并能高水平表达。3. AngⅡ组与AngⅡ+Lentiviral-GFP组细胞生长状态差,生长缓慢,形态不规则并且有不同程度脱壁悬浮的细胞;而正常细胞对照组与AngⅡ+Lentiviral-ACE2组细胞生长状态良好,圆形、卵圆形,饱满,形态正常呈“铺路石”样生长,紧密贴壁,悬浮细胞少;AngⅡ组AlamarBlue被还原率较正常细胞组明显降低(P0.05),AngⅡ+ Lentiviral-ACE2组较AngⅡ组AlamarBlue被还原率显著增高(P0.05);AngⅡ组的凋亡指数(0.1165±0.0181)与正常细胞对照组凋亡指数(0.0373±0.0113)相比具有明显统计学意义(P0.05),同时与AngⅡ+Lentiviral-ACE2组凋亡指数(0.0540±0.0061)相比,也具有明显统计学意义(P0.05)。AngⅡ组与AngⅡ+Lentiviral-GFP相比、正常细胞对照组与AngⅡ+Lentiviral-ACE2组相比的AlamarBlue被还原率和凋亡指数无统计学意义。 结论慢病毒表达载体Lentiviral-ACE2成功构建并能高效率感染人脐静脉内皮细胞;AngⅡ具有促进人脐静脉内皮细胞增殖能力下降和凋亡增加的作用,ACE2表达增加能抑制AngⅡ诱导的人脐静脉内皮细胞增殖活性降低和凋亡增加,对人脐静脉内皮细胞具有保护作用。
[Abstract]:Objective to construct a lentivirus expression vector carrying ACE2 gene, and to observe the effect of increased ACE2 expression on the decrease of proliferation activity and apoptosis of human umbilical vein endothelial cells induced by Ang 鈪，

本文编号：1930126