结核分枝杆菌Rv2460c基因的克隆,表达及编码产物的免疫特性分析

发布时间：2018-07-12 14:34

  本文选题：结核分枝杆菌 + 重组蛋白ClpP　； 参考：《中国免疫学杂志》2015年06期

【摘要】：目的:对结核分枝杆菌Rv2460c基因(编码Clp P2蛋白)进行克隆,表达,并评价其编码产物的免疫原性。方法:扩增结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)H37Rv的Rv2460c基因,构建重组质粒p ET32a(+)-Clp P2,用IPTG诱导表达,利用亲和层析法进行纯化。用SDS-PAGE和Western blot分析重组蛋白Clp P2的表达和鉴定。用生物信息学对Mtb Clp P2的免疫原性分析和表位预测。酶联免疫吸附法(ELISA)测定兔和TB病人血清anti-Clp P2滴度。结果:重组Clp P2蛋白酶在大肠杆菌中以包涵体形式表达,经bandscan软件分析纯化蛋白的纯度为93%。生物信息学分析Mtb Clp P2蛋白具有多个优势B细胞表位和T细胞表位。ELISA法测定兔抗血清效价为1∶64 000;检测肺结核病人血清中anti-Clp P2抗体水平高于健康对照人群。结论:成功纯化了重组蛋白Clp P2和制备了特异性兔抗Clp P2多克隆抗体,实验和信息学均表明Mtb Clp P2蛋白酶有较强的免疫原性。
[Abstract]:Aim: to clone and express the Rv2460c gene of Mycobacterium tuberculosis (encoding ClpP2 protein) and evaluate its immunogenicity. Methods: the Rv2460c gene of Mycobacterium tuberculosism Mtb H37Rv was amplified and the recombinant plasmid pET32a () -ClpP2was constructed. The recombinant plasmid pET32a () -ClpP2was induced by IPTG and purified by affinity chromatography. The expression and identification of the recombinant protein ClpP2 were analyzed by SDS-PAGE and Western blot. The immunogenicity and epitope prediction of MtbClpP2 were analyzed by bioinformatics. Serum anti-Clp P2 titers were determined by enzyme linked immunosorbent assay (Elisa) in rabbits and TB patients. Results: the recombinant ClpP2 protease was expressed as inclusion body in E. coli. The purity of purified protein was 933 by bandscan software. Bioinformatics analysis showed that MtbClpP2 protein had several dominant B cell epitopes and T cell epitopes. Elisa was used to determine the titer of rabbit antiserum at 1:64 000, and the level of anti-ClpP2 antibody in pulmonary tuberculosis patients was higher than that in healthy controls. Conclusion: the recombinant protein ClpP2 was successfully purified and the specific rabbit anti-ClpP2 polyclonal antibody was prepared. The results of experiments and informatics show that Mtb ClpP2 protease has strong immunogenicity.
【作者单位】： 重庆医科大学病原生物学教研室与肿瘤研究中心;重庆医科大学附属第一医院呼吸科;
【基金】：国家青年科学基金(No.81101216) 国家临床重点专科专项经费资助(卫办医政函[2012]649号)资助
【分类号】：R378.911

【共引文献】

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