MDR1基因C3435T位点多态性与MDR1基因表达的关系及其临床意义

发布时间：2021-08-09 16:48

  第一部分MDR1基因定量表达的检测：实时定量PCR方法的建立 目的：建立实时定量PCR方法,检测多药耐药基因1(multidrug-resistance 1,MDR1)mRNA的表达水平。 方法：采用Primer 5.0软件设计PCR扩增引物,Trizol法提取MCF-7细胞株mRNA, RT-PCR扩增目标片段,T-A克隆测序验证扩增的目的基因片段序列,应用Bio-Rad icycler荧光定量PCR仪实时定量检测MDR1基因和P-actin表达,绘制目的基因MDR1和看家基因β-actin标准曲线,获得扩增效率,并进行溶解曲线分析,判断扩增的特异性。 结果：(1)成功扩增MDR1基因目标片段,并经TA克隆、测序证实；(2)溶解曲线分析MDR1及β-actin基因出现的峰值均为单峰,没有非特异性PCR扩增产物；(3)成功绘制目的基因MDR1及看家基因β-actin的标准曲线,二者的扩增效率在同一水平。 结论：成功建立实时定量PCR方法,以检测MDR1基因mRNA的表达水平。 第二部分MDR1基因C3435T位点多态性与MDR1基因表达水平的关系 目的：探讨恶性肿瘤患者MDR1基因C3435T位点多态性与MDR1基因mRNA表达水平的关系。 方法：提取74例恶性肿瘤患者外周静脉血DNA,应用聚合酶链反应。限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP)技术对MDR1基因C3435T位点进行分型,部分分型结果经DNA测序验证；应用实时定量PCR方法,测定每例患者的MDR1基因表达量,分析74例肿瘤患者MDR1基因C3435T位点多态性与MDR1基因mRNA表达水平的关系；数据分析采用SPSS 13.0软件进行多个独立样本非参数检验(Kruskal-Wallis检验)。 结果：MDR1基因C3435T位点CC、CT、TT三种基因型之间MDR1mRNA表达水平的差异有统计学意义(P=0.036)；三种基因型的相对表达量CC:CT:TT为3.01：2.55：1.0。 结论：MDR1基因C3435T位点三种基因型的MDR1 mRNA表达水平有差异,其表达水平CC、CT、TT。 第三部分MDRl基因C3435T位点多态性的临床意义 目的：探讨肿瘤患者MDR1基因C3435T位点多态性与临床化疗疗效及血液学毒性的关系。 方法：收集74例恶性肿瘤患者的临床资料,分析MDR1基因C3435T位点多态性与临床化疗疗效、血液学毒性的关系,采用SPSS 13.0统计软件对数据进行X2检验。 结果：(1)MDR1基因C3435T位点多态性与临床疗效的关系：①非小细胞肺癌患者中,TT+CT基因型组和CC基因型组的有效率(CR+PR)分别为50%和21.4%,TT+CT基因型有效率比CC基因型高,它们的差异没有统计学意义(P0.05)。②消化道肿瘤中,TT+CT基因型组和CC基因型组的有效率(CR+PR)分别为21.4%和16.7%,TT+CT基因型有效率比CC基因型高,它们的差异没有统计学意义(P0.05)。③非霍奇金淋巴瘤中,TT+CT基因型组和CC基因型组的完全缓解率(CR)分别为25%和0%,TT+CT基因型CR率比CC基因型高；两组有效率分别为66.7%和83.3%,它们的差异没有统计学意义(P0.05)。(2)MDR1基因C3435T位点多态性与血液学毒性的关系：①非小细胞肺癌患者中,TT+CT基因组和CC基因组的严重白细胞下降率(Ⅲ+Ⅳ度)分别为28.6%和14.3 %,TT+CT基因型组白细胞下降率较CC基因组高,但两组间的差异没有统计学意义(P=0.648)；两组的严重血红蛋白下降率(Ⅲ+Ⅳ度)分别为7.1%和14.3%,两组间的差异没有统计学意义(P=1.000)；两组的严重血小板下降率(Ⅲ+Ⅳ度)分别为7.1%和21.4%,两组间的差异没有统计学意义(P=0.596)。②消化道肿瘤患者中,TT+CT基因型组和CC基因型组的严重白细胞下降率(Ⅲ+Ⅳ度)分别为10.0%和33.3%,两组间的差异没有统计学意义(P=0.518)；两组的严重血红蛋白下降率(Ⅲ+Ⅳ度)分别为10.0%和0%,两组间的差异没有统计学意义(P=1.000)；两组的严重血小板下降率(Ⅲ+Ⅳ度)均为0%,两组间的差异没有统计学意义(P=1.000)。③非霍奇金淋巴瘤患者中,TT+CT基因型组和CC基因型组的严重白细胞下降率(Ⅲ+Ⅳ度)分别为45.5%和40%,两组间的差异没有统计学意义(P=1.000)；严重血红蛋白下降率(Ⅲ+Ⅳ度)均为0%,两组间的差异没有统计学意义(P=1.000)；严重血小板下降率(Ⅲ+Ⅳ度)分别为9.1%和0%,两组间的差异没有统计学意义(P=1.000)。 结论：(1)接受化疗的肿瘤患者,MDR1基因C3435T位点TT+CT基因型组比CC基因型组的有效率高,但两者之间的差异未达到统计学意义。(2)化疗后TT+CT基因型组与CC基因型组的严重血液学毒性差异无统计学意义。(3)本研究样本量偏小,结果尚需在扩大样本量研究中进一步验证。



本文编号：2117357