沙眼衣原体pORF5质粒蛋白激活NALP3炎性复合体诱导THP-细胞产生IL-1β和IL-18

发布时间：2018-07-28 20:39

【摘要】：目的:探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)pORF5质粒蛋白对IL-1β和IL-18等促炎性细胞因子的诱生作用,并初步分析其分子机制。方法:用0、3、6、12、24、36μg/ml不同浓度的pORF5蛋白刺激THP-1细胞,并于0、8、16、24、36 h收集上清及细胞,ELISA检测IL-1β和IL-18的含量;Realtime-PCR检测NALP3炎性复合体mRNA表达水平,Western blot鉴定Caspase-1活化状态;分别用NALP3 siRNA、ASC siRNA转染THP-1细胞24 h或用Caspase-1特异性抑制剂(Z-YVADFMK)预处理THP-1细胞30 min后,再用24μg/ml的pORF5质粒蛋白刺激THP-1细胞24 h,ELISA分析各处理因素对IL-1β和IL-18产生的影响。结果:pORF5质粒蛋白以浓度依赖的方式刺激THP-1细胞产生IL-1β和IL-18。当pORF5质粒蛋白浓度为24μg/ml时,IL-1β和IL-18的表达水平最高,分别为491 pg/ml、186 pg/ml;同时pORF5质粒蛋白以时间依赖的方式刺激THP-1细胞产生IL-1β和IL-18,两者分别在24 h和16 h达到峰值。pORF5质粒蛋白可增强THP-1细胞NALP3、ASC和Caspase-1 mRNA的表达,促进Caspase-1的活化;NALP3-siRNA、ASC-siRNA及Caspase-1抑制剂处理组IL-1β和IL-18的产生水平均显著低于对照组(P0.05)。结论:pORF5质粒蛋白通过激活NALP3炎性复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18。
[Abstract]:Objective: to investigate the inducing effect of Chlamydia trachomatisCt (Chlamydia trachomatisCt) pORF5 plasmid protein on proinflammatory cytokines such as IL-1 尾 and IL-18, and to analyze its molecular mechanism. Methods: THP-1 cells were stimulated with different concentrations of pORF5 protein at different concentrations of pORF5. The supernatants were collected and the contents of IL-1 尾 and IL-18 were detected by Elisa. MRNA expression of NALP3 inflammatory complex was detected by Realtime-PCR. Caspase-1 activation was identified by Western blot. THP-1 cells were transfected with NALP3 siRNA-ASC siRNA for 24 h or treated with Caspase-1 specific inhibitor (Z-YVADFMK) for 30 min, then THP-1 cells were stimulated with 24 渭 g/ml pORF5 plasmid protein for 24 h. The effects of different treatment factors on IL-1 尾 and IL-18 were analyzed by Elisa. Results the IL-1 尾 and IL-18 of THP-1 cells were stimulated by the plasmid protein of 1: pORF5 in a concentration-dependent manner. When the concentration of pORF5 plasmid protein was 24 渭 g/ml, the expression levels of IL-1 尾 and IL-18 were the highest. At the same time, pORF5 plasmid protein stimulated the production of IL-1 尾 and IL-18 in THP-1 cells in a time-dependent manner. The expression of NALP3ASC and Caspase-1 mRNA in THP-1 cells was enhanced by pORF5 plasmid protein at 24 h and 16 h, respectively. The levels of IL-1 尾 and IL-18 in NALP3-siRNA-ASC-siRNA and Caspase-1 inhibitor treatment group were significantly lower than those in control group (P0.05). Conclusion the expression of IL-1 尾 and IL-18 in THP-1 cells was induced by the activation of NALP3 inflammatory complex.
【作者单位】： 南华大学医学院病原生物学研究所/特殊病原体防控湖南省重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金(No.81102230;No.31470277) 湖南省高校创新平台开放基金(13K081) 湖南省高层次卫生人才“225”工程培养项目(2013-13) 湖南省普通高校带头人资助项目(2014-186) 湖南省特殊病原体防控重点实验室资助项目(2014-5) 分子靶标新药研究协同创新中心资助项目(2014-405)
【分类号】：R374.1

【参考文献】

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本文编号：2151509