sFRP5抑制Wnt3a对黑素细胞黑素形成作用的研究

发布时间：2017-03-30 02:12

  本文关键词：sFRP5抑制Wnt3a对黑素细胞黑素形成作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：黑素细胞来源于神经嵴，在发育过程中逐渐迁移至表皮后形成毛囊中的黑素干细胞，其主要功能是合成黑色素维持皮肤的正常着色。目前的研究发现Wnt信号通路对黑素细胞的发育和分化具有重要的调控作用，分泌型卷曲相关蛋白（sFRPs）是Wnt信号通路的拮抗因子，因其结构上与Wnt受体极为相似而发挥调节Wnt信号通路的作用。本课题着重于研究sFRP5抑制Wnt3a对黑素细胞的作用，首先在体检测sFRP5在毛囊黑素中的表达情况，并以永生化的黑素细胞为体外模型,利用腺病毒表达载体，通过检测黑素分化标志物的表达来明确sFRP5抑制Wnt3a对黑素母细胞分化和黑素形成的作用以及对Wnt/β-catenin经典通路的影响，最后以DCT-LacZ转基因小鼠为模型，在体观察sFRP5对黑素细胞的影响。主要结果如下： 1. sFRP5在毛囊黑素中表达情况的研究 采用免疫组化法检测sFRP5在小鼠毛囊黑素谱系中的表达，结果发现：在生长期sFRP5蛋白在Bulge的外根鞘以及外根鞘和毛基质之间的部位表达，在退化期sFRP5蛋白的表达减少，在静止期几乎未检测出sFRP5的表达。sFRP5mRNA的表达情况与免疫组化结果一致。 2.sFRP5抑制Wnt3a对黑素细胞作用的体外研究 以永生化的黑素细胞为模型，利用腺病毒表达载体，设置Control组、Wnt3a处理组、 Wnt3a+sFRP5处理组进行实验，检测黑素细胞黑素形成能力和分化标志物的表达。结果发现：L-DOPA测定酪氨酸酶活性结果显示Wnt3a+sFRP5处理组酪氨酸酶活性低于Wnt3a处理组，Masson-Fontanas银染色法和NaOH裂解法定量检测黑素含量显示Wnt3a+sFRP5处理组形成的黑素明显降低，RT-PCR和Western blot检测结果显示Wnt3a+sFRP5处理组能下调TRP-1、TYR、MITF基因和蛋白的表达。 3.sFRP5对Wnt/β-catenin信号通路的影响 运用RT-PCR、Western blot和Top-luc荧光素酶报告基因分析β-catenin的表达情况，，结果如下:Wnt3a+sFRP5处理组β-catenin的基因和蛋白表达水平明显下调，荧光素酶报告基因分析结果一致。 4. sFRP5抑制Wnt3a对黑素细胞作用的体内研究 运用DCT-LacZ转基因小鼠模型在毛囊静止期皮内注射腺病毒，结果发现：注射后8天可以见到Ad-Wnt3a处理部位皮肤颜色明显变黑，Ad-GFP和Ad-Wnt3a+Ad-sFRP5注射部位皮肤为粉色；组织学切片HE染色显示Ad-Wnt3a处理组小鼠皮肤毛囊中的成熟黑素细胞明显增多，Ad-Wnt3a+Ad-sFRP5联合处理组未观察到成熟的黑素细胞。 本课题首次证明了sFRP5在小鼠毛囊周期黑素细胞谱系中的表达情况，并且从体内和体外两个方面证明sFRP5抑制了Wnt3a促进黑素形成的作用，该实验为研究黑素干细胞分化调节的机制提供了另一途径，对临床上色素脱失性疾病如白癜风的治疗也有很好的提示作用。
【关键词】：sFRP5 Wnt3a 黑素细胞
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 前言12-15
• 第一部分 sFRP5 调节 Wnt3a 对黑素细胞作用的体外研究15-38
• 引言15
• 1 材料与方法15-28
• 2 结果28-34
• 3 讨论34-36
• 小结36-38
• 第二部分 sFRP5 调节 Wnt3a 对黑素细胞作用的体内研究38-47
• 引言38
• 1 材料与方法38-42
• 2 结果42-45
• 3 讨论45-46
• 小结46-47
• 全文总结47-48
• 参考文献48-51
• 文献综述51-58
• 参考文献55-58
• 致谢58-59
• 硕士期间发表论文59-60

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