Hib多糖蛋白结合疫苗中残余物质质控方法研究

发布时间：2017-03-30 02:16

  本文关键词：Hib多糖蛋白结合疫苗中残余物质质控方法研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：b型流感嗜血杆菌结合疫苗简称Hib结合疫苗,人体特别是2岁以下幼儿接种该疫苗后可以产生针对b型流感嗜血杆菌的特异性抗体而得到保护。b型流感嗜血杆菌荚膜抗原的组成是多聚核糖基核糖醇磷酸盐(PRP),单纯的PRP免疫原性很差,属于T细胞非依赖性抗原,对于免疫系统还不成熟的2岁以下的婴幼儿来说,必须将Hib荚膜多糖从TI抗原转化为TD抗原,因此,需要使用化学手段将具有载体效应的蛋白质分子与Hib荚膜多糖共价结合起来,使荚膜多糖获得载体效应,最终使该疫苗具有二次免疫后的加强免疫效果。 本文包括三个部分。第一部分是前言,这部分介绍了Hib疫苗的背景信息和主要生产工艺,回顾了多糖蛋白结合疫苗制造工艺中常用的化学联接方法。第二部分是研究报告,针对溴化氰、CDAP(1-氰基-4-二甲基氨基-吡啶四氟化硼)、EDAC(碳二亚胺)和ADH(己二酸二酰肼)四种结合常用的化学物质进行了分析方法的摸索和开发,最终建立了能够达到预定要求的四种方法,分别如下： 1、研究建立了Hib多糖蛋白结合疫苗中残余溴化氰检测方法。该方法基于高效阴离子交换色谱串联电化学检测器,该方法样品检测速度快,单个样品上样分析只需10分钟。并对该方法进行了全面的方法学验证。验证结果表明该方法专属性好,最小定量限可以达到5μg／L,检出范围在10-1001μg/L时线性良好,是一个比较好的检测Hib多糖蛋白结合疫苗中残余氰化物的方法。 2、研究建立了Hib多糖蛋白结合疫苗中残余CDAP检测方法。该方法基于高效阳离子交换色谱串联紫外检测器,使用该方法对单个样品上样只需30分钟就可完成分析。后期对该方法进行了方法学验证,验证结果表明该方法专属性好,最小定量限可以达到16μg/L,检出范围在100-1000μg/L时线性良好,是一个比较好的检测Hib多糖蛋白结合疫苗中残余CDAP的方法。 3、研究建立了Hib多糖蛋白结合疫苗中残余EDAC的检测方法,该方法使用的设备是高效液相色谱串联三重四级杆质谱,该方法专属性好,最小定量限可以达到0.2μg/L,检出范围在10-100μg/L时线性良好。使用该方法对单个样品上样只需5-8分钟就可完成分析。后期对该方法进行了方法学验证。验证结果表明该方法操作简便,数据准确可靠,是一个比较好的检测Hib多糖蛋白结合疫苗中残余EDAC的方法。 4、研究建立了Hib多糖蛋白结合疫苗中残余ADH的检测方法。该办法采用了化学显色分光光度法,耗时短,操作简便,检测成本低廉。后期对该方法进行了方法学验证。验证结果表明,该方法专属性好,检出范围在2-20μg/mL时线性良好,测定范围可以低至1μg/mL,是一个比较好的检测Hib多糖蛋白结合疫苗中残余ADH的方法。 第三部分是研究结论、展望和体会。通过本研究建立的四种检测方法有效、可靠,可以用来对相关物质残余水平进行定量分析,为相关生产工艺的验证提供了方法上的支持,有利于Hib结合疫苗的质量控制,进一步提高了疫苗的质量。在多糖蛋白结合疫苗这一领域,不同的结合方法需要不同的化学物质,因此,为保证疫苗的安全性,在残余物质监控上还有很多的工作可以进行。
【关键词】：Hib结合疫苗 残余物质 质量控制 色谱 分光光度法
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：O657;R392
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-7
• 目录7-9
• 第一章 前言9-27
• 1.1 b型流感嗜血杆菌多糖蛋白结合疫苗9-14
• 1.1.1 Hib疾病9
• 1.1.2 病原体9-10
• 1.1.3 传播途径及发病机理10
• 1.1.4 流行病学10
• 1.1.5 第一支b型流感嗜血杆菌疫苗10-11
• 1.1.6 结合疫苗11-12
• 1.1.7 结合疫苗的效果12-13
• 1.1.8 b型流感嗜血杆菌结合疫苗的质量控制13-14
• 1.2 b型流感嗜血杆菌结合疫苗的生产制造14-20
• 1.2.1 生产过程14-17
• 1.2.2 过程控制17-20
• 1.3 多糖蛋白结合疫苗中常用的结合策略20-27
• 1.3.1 还原胺化20-22
• 1.3.2 硫醚连接22
• 1.3.3 通过肟键形成的复合物22-23
• 1.3.4 同型双功能连接剂23-24
• 1.3.5 通过环加成进行结合24-25
• 1.3.6 施陶丁格连接法25-27
• 第二章 Hib结合疫苗中残余物质检测方法的建立27-58
• 2.1 Hib多糖蛋白结合疫苗中残余溴化氰检测方法的建立27-36
• 2.1.1 引言27
• 2.1.2 实验部分27-29
• 2.1.3 结果与讨论29-36
• 2.2 Hib多糖蛋白结合疫苗中残余CDAP检测方法的建立36-44
• 2.2.1 引言36
• 2.2.2 实验部分36-38
• 2.2.3 结果与讨论38-44
• 2.3 Hib多糖蛋白结合疫苗中残余EDAC检测方法的建立44-52
• 2.3.1 引言44
• 2.3.2 实验部分44-46
• 2.3.3 结果与讨论46-52
• 2.4 Hib多糖蛋白结合疫苗中残余ADH检测方法的建立52-58
• 2.4.1 引言52
• 2.4.2 实验部分52-54
• 2.4.3 结果与讨论54-58
• 第三章 结论58-61
• 3.1 实验结论58-59
• 3.2 研究展望59
• 3.3 课题研究心得体会59-61
• 参考文献61-63
• 在学期间的研究成果63-64
• 致谢64

【参考文献】

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1 杨丽华;谢欣;吴梅;司杨乐;孙慧军;杨忠辉;;已二酰肼及溴化氰检测方法重复性研究[J];微生物学杂志;2006年05期

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本文编号：275997