shRNA干扰Nod样受体蛋白在新生大鼠脑缺血再灌注模型中的作用及机制

发布时间：2020-10-31 00:26

　　 目的探究shRNA(short hairpin RNA)干扰Nod样受体蛋白(NLRP3)对新生大鼠脑缺血再灌注模型(MCAO)的心肌损伤和免疫反应的作用及机制。方法构建新生大鼠MCAO,实验分4组:假手术组、模型组(MCAO组)、MCAO+阴性对照组和MCAO+sh-NLRP3组,每组10只。采用RT-PCR和蛋白质印迹技术(Western blot)检测NLRP3表达;HE染色观察心肌组织病理学改变;免疫组化检测Ki67表达;Western blot检测Ki67和PCNA表达;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡率;Western blot检测心肌细胞Caspase-3、Caspase-9表达;Elisa检测Mb、CK-MB和cTnⅠ含量及心肌炎标记分子IL-1β、iNOS、IL-6表达;Western blot检测TGF-β1、NF-κB p65和TNF-α表达。结果sh-NLRP3能抑制模型大鼠NLRP3在基因和蛋白水平上的表达(P0.01),改善心肌坏死,上调心肌组织中Ki67和PCNA表达(P0.01),降低心肌细胞凋亡率(P0.01)和Caspase-3、Caspase-9的蛋白表达(P0.01),降低大鼠血清中Mb、cTnⅠ和CK-MB的含量(P0.01),同时下调TGF-β1、P-P65/P65和TNF-α的蛋白表达。结论sh-NLRP3对MCAO新生大鼠的心肌损伤和免疫反应起保护作用,其机制与抑制TGF-β1/NF-κB p65/TNF-α炎症通路活化相关。
【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验动物
    1.2 试剂与仪器
    1.3 实验方法
        1.3.1 制备动物模型
        1.3.2 分组给药
        1.3.3 RT-PCR
        1.3.4 蛋白质印迹技术（Wertern blot）
        1.3.5 HE染色
        1.3.6 免疫组织化学
        1.3.7 TUNEL染色
        1.3.8 Elisa
    1.4 统计学方法
2 结果
    2.1 sh-NLRP3对4组大鼠心肌组织中NLRP3表达的干扰作用
    2.2 sh-NLRP3对4组大鼠心肌病理损伤的比较
    2.3 sh-NLRP3对4组大鼠心肌组织Ki67、PCNA表达的影响
    2.4 sh-NLRP3对4组大鼠心肌细胞凋亡的影响
    2.5 sh-NLRP3对4组大鼠心肌损伤标记物含量的影响
    2.6 sh-NLRP3对4组大鼠TGF-β1、P-NF-κB p65和下游TNF-α表达的影响
    2.7 sh-NLRP3对4组大鼠心肌炎标记分子表达的影响
3 讨论

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：2863209