TRIB3沉默对缺氧-缺血新生大鼠海马神经元细胞凋亡的影响
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x±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD检验。P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1OGD后海马神经元细胞中TRIB3表达情况Westernblot结果显示(图1A),与Control组比较,OGD组TRIB3蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。qRT-PCR结果显示(图1B),与Control组比较,OGD组TRIB3mRNA表达水平明显增加(P<0.05)。此外,与siNC组比较,TRIB3siRNA显著降低TRIB3基因的表达水平(P<0.05)。*P<0.05图1OGD后海马神经元细胞中TRIB3基因表达的比较2.2TRIB3低表达促进OGD后海马神经元细胞增殖MTT检测结果显示(图2):与siNC组比较,siTRIB3组细胞存活率显著增加(P<0.05)。*P<0.05图2TRIB3低表达促进OGD后海马神经元细胞增殖2.3TRIB3低表达抑制OGD后海马神经元细胞凋亡Westernblot检测结果显示(图3):与Control组比较,OGD组Bcl-2/Bax比率显著降低(P<0.05),Caspase3表达显著升高(P<0.05)。与siNC组比较,TRIB3siRNA组Bcl-2/Bax比率显著增加(P<0.05),而Caspase3蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。2.4TRIB3低表达可以抑制NF-κB活化水平Westernblot实验结果显示(图4):与siNC组比较,TRIB3siRNA组NF-κB蛋白水平显著降低(P<0.05)。此外,与siTRIB3组比较,加入内质网应激诱导物Tg之后,NF-κB蛋白表达水平显著上升(P<0.05)。3讨论本研究发现海马神经元细胞在缺氧缺血后TRIB3蛋白和mRNA表达水平显著升高
楸冉希?OGD组TRIB3蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。qRT-PCR结果显示(图1B),与Control组比较,OGD组TRIB3mRNA表达水平明显增加(P<0.05)。此外,与siNC组比较,TRIB3siRNA显著降低TRIB3基因的表达水平(P<0.05)。*P<0.05图1OGD后海马神经元细胞中TRIB3基因表达的比较2.2TRIB3低表达促进OGD后海马神经元细胞增殖MTT检测结果显示(图2):与siNC组比较,siTRIB3组细胞存活率显著增加(P<0.05)。*P<0.05图2TRIB3低表达促进OGD后海马神经元细胞增殖2.3TRIB3低表达抑制OGD后海马神经元细胞凋亡Westernblot检测结果显示(图3):与Control组比较,OGD组Bcl-2/Bax比率显著降低(P<0.05),Caspase3表达显著升高(P<0.05)。与siNC组比较,TRIB3siRNA组Bcl-2/Bax比率显著增加(P<0.05),而Caspase3蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。2.4TRIB3低表达可以抑制NF-κB活化水平Westernblot实验结果显示(图4):与siNC组比较,TRIB3siRNA组NF-κB蛋白水平显著降低(P<0.05)。此外,与siTRIB3组比较,加入内质网应激诱导物Tg之后,NF-κB蛋白表达水平显著上升(P<0.05)。3讨论本研究发现海马神经元细胞在缺氧缺血后TRIB3蛋白和mRNA表达水平显著升高。TRIB3低表达促进缺氧缺血后海马神经元细胞增殖,增加Bcl/Bax比值,·229·现代医学(ModernMedicalJournal)2019年8月,47(8)
*P<0.05图3TRIB3低表达抑制OGD后海马神经元细胞凋亡*P<0.05图4TRIB3低表达抑制NF-κB蛋白表达水平降低Caspase-3蛋白表达水平并抑制NF-κB蛋白表达。另外,内质网应激诱导物Tg可以逆转TRIB3沉默对NF-κB蛋白表达的抑制作用。研究结果表明TRIB3低表达促进缺氧缺血后海马神经元细胞增殖、抑制细胞凋亡,其机制与抑制NF-κB蛋白表达水相关。TRIB3是TRIB基因家族成员之一,在哺乳动物体内,该家族成员有三个,分别是TRIB1、TRIB2和TRIB3,其中研究最多的是TRIB3。TRIB3首次是在果蝇中发现的一种抑制有丝分裂的丝氨酸苏氨酸蛋白激酶[8]。近年来,研究发现,TRIB3在不同器官组织细胞中差异性表达。在胃癌[9]、结直肠癌[10]、肺癌和食管癌[11]等不同癌症中,TRIB3表达水平中显著升高。在脱髓鞘的突变鼠髓磷脂分解过程中,TRIB3的表达显著上升[12]。此外,TRIB3的蛋白表达在帕金森症患者黑质致密部的多巴胺能神经元中显著上调,同时在帕金森细胞模型中也增加[13]。然而,TRIB3在新生儿缺氧缺血性脑损伤中的表达情况未见报道。于是,我们采用缺氧缺血诱导海马神经元细胞建立新生儿缺氧缺血性脑损伤模型,并采用Westernblot和qRT-PCR检测了TRIB3的表达。结果发现缺氧缺血后海马神经元细胞TRIB3蛋白和mRNA表达水平显著升高,提示TRIB3差异性表达也与新生儿缺氧缺血性脑损伤有关。研究发现[14-15],HIBD可以导致内质网应激,进而启动神经细胞凋亡。此外,Fang等[
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