血清饥饿处理对人角质形成细胞系HaCaT细胞自噬的调控效应研究
本文关键词:血清饥饿处理对人角质形成细胞系HaCaT细胞自噬的调控效应研究,,由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】:细胞的自稳是通过对细胞内成分合成和降解的精确调节而实现。细胞内降解物质的途径有两类,一类是蛋白酶体途径,主要降解短寿命蛋白质,还有一类就是自噬途径,主要降解长寿命蛋白质及细胞器。自噬存在于所有的真核细胞中,它对于保持细胞内环境稳定很重要。自噬可分为三类:巨自噬(macroautophagy)、微自噬(mieroautophagy)和分子伴侣介导的自噬(chap rone mediated autophagy)。巨自噬是胞浆内成份进行循环的主要途径,通常所说的自噬就是指巨自噬。饥饿是细胞自噬最为重要的诱导因素,然而目前饥饿对角质形成细胞自噬调控效应的研究资料较为缺乏。 目的研究血清饥饿处理对人角质形成细胞系HaCaT细胞自噬的调控效应,并初步分析其分子机制,进而为通过调节细胞的自噬水平控制和治疗皮肤病打下基础。 方法对体外培养的HaCaT细胞进行血清饥饿处理,使用透射电镜观察超微结构改变,使用western-blot方法进行自噬标志性分子LC3Ⅱ蛋白表达分析,进而对mTOR的蛋白表达及其ser2448位点磷酸化产物水平进行分析。 结果电镜观察发现血清饥饿处理的细胞中有自噬体囊泡形成;western-blot显示LC3Ⅱ蛋白表达较正常培养的细胞显著上调。血清饥饿处理的细胞中mTOR的ser2448位点磷酸化产物水平显著降低。 结论血清饥饿处理可以诱导HaCaT细胞发生自噬,并且这种自噬活性的诱导可能与自噬调控关键元件mTOR的ser2448位点磷酸化产物水平降低相关。
【关键词】:血清饥饿 角质形成细胞 自噬
【学位授予单位】:天津医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:R363
【目录】:
- 中文摘要4-5
- Abstract5-7
- 缩略表7-8
- 前言8-13
- 研究现状、成果8-12
- 研究目的、方法12-13
- 1、材料13-22
- 1.1 、细胞13
- 1.2 、试剂13-14
- 1.3 、仪器14
- 2、方法14
- 2.1 、细胞培养14-16
- 2.2 、血清饥饿处理16
- 2.3 、透射电镜分析16-17
- 2.4 、Western Blot实验17-22
- 3、结果22-27
- 3.1 、常规细胞形态学改变22-23
- 3.2 、透射电镜观察超微结构23-25
- 3.3 、LC3 Ⅱ表达分析结果25
- 3.4 、mTOR表达及其ser2448位点磷酸化水平分析25-27
- 4、讨论27-30
- 结论30-31
- 参考文献31-34
- 发表论文和参加科研情况说明34-35
- 综述一、紫外线治疗皮肤病的研究进展35-49
- 参考文献44-49
- 综述二、紫外线对皮肤细胞自噬相关信号通路的调控作用研究49-59
- 参考文献56-59
- 致谢59-61
【参考文献】
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