以霍乱毒素B亚单位为载体的甲型副伤寒多糖结合疫苗理化及生物学特性

发布时间：2020-11-09 21:35

　　 目的制备甲型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi A,SPA)O特异多糖(O-specific polysaccharide,OSP)-霍乱毒素B亚单位(cholera toxin B subunit,CTB)结合疫苗,并初步探讨其理化及生物学特性。方法 SPA OSP多糖原液(简称OSP多糖)经溴化氰活化,己二酰肼(ADH)衍化,在碳二亚胺(EDAC)作用下与CTB偶联,结合物经Sepharose4FF柱纯化,获得多糖-蛋白结合物,对其理化指标、血清特异性、免疫原性及血清体外杀菌力进行检测。结果制备的SPA OSP-CTB结合物(简称OSP-CTB结合物)衍化度为(2. 63±0. 13)%、多糖回收率为(74±0. 2)%;鉴别试验显示OSP-CTB结合物与SPA O诊断血清、CTB抗体均有阳性沉淀线产生;免疫小鼠血清中OSP-CTB结合物抗体滴度显著增长,阳转率达100%,血清体外杀菌抗体滴度为1∶64。结论用溴化氰活化多糖制备的SPA OSP-CTB结合物具有良好免疫原性,可进一步进行疫苗研发。
【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 原液、血清及菌株
    1.2 主要试剂及仪器
    1.3 实验动物
    1.4 OSP-CTB结合物制备
    1.5 OSP-CTB结合物检测
        1.5.1 蛋白及多糖含量测定
        1.5.2 结合物分子大小分布
        1.5.3 鉴别试验
        1.5.4 EDAC及氰化物残留量测定
        1.5.5 O-乙酰基含量测定
        1.5.6 游离多糖测定
    1.6免疫原性检测
    1.7免疫血清体外杀菌力检测
2 结果
    2.1 OSP-CTB结合物HPLC分析
    2.2 OSP-CTB结合物理化指标及血清特异性检测
        2.2.1蛋白及多糖含量
        2.2.2 结合物分子大小分布
        2.2.3 鉴别试验
        2.2.4 EDAC及氰化物残留量
        2.2.5 O-乙酰基含量
        2.2.6 游离多糖含量
    2.3 免疫原性检测
        2.3.1 OSP多糖免疫原性
        2.3.2 OSP-CTB结合物免疫原性
    2.4 免疫血清体外杀菌力
        2.4.1 OSP多糖与OSP-CTB结合物免疫血清体外杀菌力
        2.4.2 不同免疫次数OSP多糖与OSP-CTB结合物免疫血清体外杀菌力
3 讨论

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 谭亚军;张庶民;侯启明;;多糖蛋白结合疫苗中载体蛋白的研究与应用[J];中国疫苗和免疫;2013年04期

2 廖翔;霍乱毒素佐剂的研究进展[J];生物技术通讯;2003年01期

【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：2876999