人脂肪间充质干细胞来源的造血干细胞向CIK细胞的诱导分化研究

发布时间：2017-04-06 05:00

  本文关键词：人脂肪间充质干细胞来源的造血干细胞向CIK细胞的诱导分化研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： （1）改良体外分离培养人脂肪间充质干细胞和脐带间充质干细胞的方法，比较两种来源间充质干细胞的成长特性； （2）探索多种细胞因子联合诱导下，脂肪间充质干细胞来源的造血干细胞（ADMSC-HSCs）能否分化为同时表达CD3+CD56+的淋巴系免疫细胞，即CIK细胞。 方法： （1）采用改良酶消化法分离提取人脂肪和脐带标本中的间充质干细胞.通过贴壁培养纯化细胞，记录原代间充质细胞生长情况；使用倒置显微镜和吉姆萨染色观察原代和传代后两种细胞形态差别；通过MTT法绘制生长曲线比较两种细胞的增殖速率；使用流式细胞仪检测两种来源的间充质干细胞的特征表面分子。 （2）取第三代脂肪间充质干细胞，利用经由细胞穿透肽转染shRNA（shRNA-337）并加入特定成分培养基诱导其定向分化，培养5天后，经流式细胞仪检测诱导细胞的造血干细胞特征性表面分子CD34、CD38、CD45表达情况。并收获脂肪间充质细胞来源的造血干细胞（ADMSC-HSCs）加入CIK诱导体系继续培养，培养7天、14天分别后检测CIK细胞表面标志分子CD3、CD56表达情况。 结果： （1）经改良酶消化法均能成功获得的人脂肪间充质干细胞和脐带间充质干细胞，脂肪充质干细胞的原代细胞增殖速度较快。两种间充质干细胞均呈典型的短梭形、漩涡样贴壁生长，脐带间充质干细胞体积较大。通过分析生长曲线，脐带间充质细胞的倍增速度略快于脂肪间充质干细胞。两种间充质干细胞均表达CD29、CD44、CD90、CD166间充干细胞特征表面分子，不表达CD34、CD45、CD49f、CD133。 （2）脂肪间充质干细胞经细胞穿透肽转染shRNA-337后，诱导培养5天，细胞形态和分子表型均发生改变，ADMSC-HSCs呈集落样悬浮生长，产生CD34，CD38，CD45造血干细胞表面标志物；收获后的ADMSC-HSCs经CIK细胞诱导培养体系培养后14天出现CD3，CD56高阳性表达，CIK效应细胞CD3+CD56+细胞比率可达(25.12±1.38)%。 结论： （1）改良酶消化法能成功分离脂肪间充质干细胞和脐带间充质干细胞，脂肪间充质干细胞倍增速度略慢于脐带间充质细胞，，但二者表达的干性表面标志一致。 （2）脂肪间充质干细胞来源的的造血干细胞（hADMSC-HSCs）有诱导分化为CIK细胞的能力。
【关键词】：shRNA-337 转染 间充质干细胞 造血干细胞 CIK细胞
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 中英文缩略词表9-10
• 第1章 引言10-14
• 1.1 间充质干细胞特性和研究进展10-11
• 1.2 恶性肿瘤的发生现状和细胞免疫治疗11-13
• 1.3 小 RNA 与干细胞分化调控13-14
• 第2章 材料与方法14-26
• 2.1 实验仪器、材料与试剂14-17
• 2.1.1 实验仪器14-15
• 2.1.2 实验材料15
• 2.1.3 实验试剂15-16
• 2.1.4 实验试剂配置16-17
• 2.2 实验方法17-25
• 2.2.1 间充质干细胞原代细胞提取17-18
• 2.2.2 间充质干细胞细胞培养18-19
• 2.2.3 间充质干细胞吉姆萨染色19
• 2.2.4 MTT 法测定细胞生长曲线19-20
• 2.2.5 间充质干细胞表面分子标志物检测20-21
• 2.2.6 多胜肽 GenoFect 细胞转染效率测定21-22
• 2.2.7 ADMSC-HSCs 诱导分化22-23
• 2.2.8 ADMSC-HSCs 细胞特征表面分子鉴定23
• 2.2.9 CIK 细胞的诱导分化23-24
• 2.2.10 CIK 细胞特征表面分子鉴定24-25
• 2.3 统计方法25-26
• 第3章 结果26-37
• 3.1 ADMSCs 和 UCMSCs 生长特性26-28
• 3.2 ADMSCs 和 UCMSCs 体外增殖特点28
• 3.3 ADMSCs 和 UCMSCs 的细胞免疫表型28-30
• 3.4 多胜肽 GenoFect 细胞转染效率30-32
• 3.5 ADMSC-HSCs 形态特征32-33
• 3.6 ADMSC-HSCs 细胞特征表面分子鉴定33
• 3.7 CIK 细胞形态特征33-34
• 3.8 CIK 细胞特征表面分子鉴定34-37
• 第4章 讨论37-41
• 4.1 两种间充质干细胞培养与临床应用前景37-38
• 4.2 间充质干细胞转分化为造血干细胞理论基础38-39
• 4.3 ADMSC-HSCs 来源的 CIK 细胞39-41
• 第5章 结论41-42
• 致谢42-43
• 参考文献43-46
• 攻读学位期间的研究成果46-47
• 综述47-53
• 参考文献51-53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 王其京;王慧;潘科;;自体CIK、DC-CIK与半合子DC-CIK抗肿瘤免疫反应的比较研究(英文)[J];癌症;2010年07期

2 ;Autologous cytokine-induced killer cell therapy in clinical trial phase I is safe in patients with primary hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2004年08期

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本文编号：288262