过表达GATA-4骨髓间充质干细胞外泌体中miR-330-3p的时-量变化

发布时间：2020-11-14 02:25

　　 背景:前期实验已经证明过表达GATA-4骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)分泌的外泌体(exosomes)可以通过抑制心肌细胞凋亡,有效修复心肌梗死引起的心肌损伤,进一步发现在其外泌体中miRNA-330-3p明显高表达且功能涉及抗凋亡,提示miRNA-330-3p可能是外泌体修复心肌损伤的关键分子。目的:探讨过表达GATA-4小鼠BMSCs分泌的外泌体(BMSCs~(GATA-4)-exosomes)中miR-330-3p的时-量变化。方法:在过表达GATA-4小鼠BMSCs培养体系内加入miR-330-3p模拟剂(miR-330-3p-mimic)及抑制剂(miR-330-3p-inhibitor)作为BMSCs~(GATA-4-miR-330-3p-mimic)组及BMSCs~(GATA-4-miR-330-3p-inhibitor)组,将BMSCs~(GATA-4)组、BMSCs~(GATA-4-空载体)组、BMSCs组、BMSCs~(GATA-4-miR-330-3p-mimic-空载体)组及BMSCs~(GATA-4-miR-330-3p-inhibitor-空载体)组作为混杂因素对照组。上述各组与基因开启剂强力霉素共培养24,48 h,提取各组细胞分泌的外泌体。采用RT-PCR检测各组细胞及其外泌体内miR-330-3p的表达量。采用光镜评估BMSCs~(GATA-4-miR-330-3p-mimic)组、BMSCs~(GATA-4-miR-330-3p-inhibitor)组与BMSCs组细胞在24,48 h的形态变化。结果与结论:①BMSCs~(GATA-4-miR-330-3p-mimic)组细胞与外泌体内miR-330-3p的表达率最高,且随着时间推移其miR-330-3p的表达逐渐增多;②BMSCs~(GATA-4-miR-330-3p-inhibitor)组细胞与外泌体内miR-330-3p的表达率最低,且随着时间推移其miR-330-3p的表达逐渐减少;③BMSCs~(GATA-4-miR-330-3p-mimic)组、BMSCs~(GATA-4-miR-330-3p-inhibitor)组与BMSCs组在24,48 h的形态无变化;④结果表明,BMSCs内miR-330-3p表达与外泌体内miR-330-3p表达正相关,BMSCs过表达miR-330-3p可以有效提高外泌体中miR-330-3p的表达,而静默miR-330-3p可以有效减少外泌体中miR-330-3p的表达。
【文章目录】：
文章快速阅读:
文题释义:
0引言Introduction
1 材料和方法Materials and methods
    1.1 设计
    1.2 时间及地点
    1.3 材料
        1.3.1 实验试剂
        1.3.2 实验动物
    1.4 实验方法
        1.4.1 小鼠BMSCs的分离、培养及鉴定
        1.4.2 慢病毒载体及基因开启技术构建过表达GATA-4的BMSCs
        1.4.3 外泌体的提取
        1.4.4细胞分组及处理
        1.4.5 细胞培养形态变化
        1.4.6 RT-PCR评估细胞及外泌体内miR-330-3p的时-量变化
    1.5 主要观察指标
    1.6 统计学分析
2 结果Results
    2.1 小鼠BMSCs三系分化结果
    2.2 慢病毒转染48h后小鼠BMSCs中GATA-4的表达
    2.3 采用ExoQuick-TC法提取外泌体的形态
    2.4 光镜评估细胞培养24, 48 h的形态改变
    2.5 采用RT-PCR法检测培养24 h各组细胞及外泌体内miR-330-3p的表达
    2.6采用RT-PCR法检测培养48 h各组细胞及分泌的外泌体内miR-330-3p的表达
3 讨论Discussion

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