构建表达膜锚定荧光素酶的载体实现细胞自发光成像

发布时间：2020-11-17 13:23

　　 目的:构建能稳定表达膜锚定Gaussia荧光素酶(GLuc)的载体,以实现细胞自发光成像。方法:采用人源表皮生长因子受体(EGFR)、巨噬细胞集落刺激因子受体(MCSFR)、白细胞介素-4受体α链(IL4Rα)信号肽将GLuc的信号肽替换掉,并在GLuc后分别加上EGFR、MCSFR及IL4Rα的跨膜结构域,构建表达膜锚定的GLuc的载体,用慢病毒感染的方法将其导入永生化的小鼠外周血来源巨噬细胞(iBloodMC),通过在细胞和培养上清中加入GLuc底物检测发光,从而检测GLuc的表达。结果:iBloodMCGLuc-EGFR和iBloodMCGLuc-IL4Rα均能稳定表达荧光素酶,且iBloodMCGLuc-EGFR的GLuc表达量较高,EGFR将GLuc锚定在膜上效果较好。结论:表达膜锚定GLuc的载体构建成功,将其导入细胞,加入底物可实现细胞自发光成像。
【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 仪器与试剂
    1.2 表达膜锚定荧光素酶慢病毒载体构建
    1.3 表达膜锚定荧光素酶的慢病毒包装
    1.4 永生化外周血来源巨噬细胞培养及感染
    1.5 细胞体外成像检测
2 结果
    2.1 慢病毒感染永生化小鼠外周血来源巨噬细胞结果
    2.2 发光成像结果
3 结论

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 朴春梅;邱淑兰;刘飒;王绿娅;杜杰;;小动物活体成像生物发光稳定细胞株的构建[J];新乡医学院学报;2014年06期

2 董磊;刘娟;马红雨;全首祯;朱美财;;荧光素酶光学成像技术研究进展[J];国际生物医学工程杂志;2012年06期

【共引文献】

相关期刊论文 前1条

1 马友才;刘燕;朴春梅;王绿娅;杜杰;;利用小动物活体成像技术检测心肌梗死后炎症的进程[J];心肺血管病杂志;2015年06期

【二级参考文献】

相关期刊论文 前7条

1 李珂;赵光;何伟华;高春芳;;活体动物成像光学技术的应用研究[J];新乡医学院学报;2011年06期

2 刘静;张国君;;光学分子影像技术及其在药物研发领域的应用[J];生物物理学报;2011年08期

3 黄伟;吕明;李保卫;王玉丽;邵荣光;高钟镐;;大鼠脑胶质瘤荧光素酶动物模型建模细胞株C6-Luc的构建[J];解放军医学杂志;2011年01期

4 李艳;张海燕;王喆;张必良;;通过活体动物光学成像系统建立乳腺癌动物模型[J];肿瘤;2009年01期

5 黄新新;何苗;施汉昌;蔡强;;用于环境污染物遗传毒性评价的重组发光细菌载体的构建[J];环境科学;2008年11期

6 蒋谦;陈环球;周晓明;何晓松;戴美红;俞军;;多西紫杉醇对人胃癌细胞BGC-823 hTERT启动子转录活性及其调控基因c-myc表达的研究[J];中华肿瘤防治杂志;2007年20期

7 姚文娟;刁振宇;邓小昭;孔晶;周宗安;高健;张云;;以报告基因荧光素酶研究HPRE功能元件与IFN-α应答的关系[J];细胞与分子免疫学杂志;2006年05期

【相似文献】

相关期刊论文 前4条

1 陆琤;张硌;张鹏;;构建表达膜锚定荧光素酶的载体实现细胞自发光成像[J];中国医学装备;2019年10期

2 杨平;戴五星;刘朔捷;郭萍;马彦彬;唐成武;程继忠;;血吸虫Sj26膜锚定表达DNA疫苗的构建、表达及其免疫原性[J];华中科技大学学报(医学版);2007年02期

3 唐建蓉;抗JEV质粒DNA免疫:膜锚定和分泌性包膜蛋白的免疫原性[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;2003年02期

4 王爽;许坚吉;刘晓霓;陈德喜;;荧光素酶生物发光报告体系的优化及在肝癌荷瘤裸鼠模型中的应用[J];实用肝脏病杂志;2019年04期

相关硕士学位论文 前4条

1 王鑫;分枝杆菌同源膜锚定表达载体的构建与细胞定位分析[D];苏州大学;2011年

2 邹镇;日本血吸虫23KD膜蛋白的原核表达与纯化及双价膜锚定型和分泌型表达疫苗抗感染效果的比较研究[D];华中科技大学;2009年

3 杨平;人结核杆菌Hsp65和Ag85B双价膜锚定表达DNA疫苗pIRES-MTHsp65-Ag85B的构建和日本血吸虫pIRES-Sj26膜锚定表达疫苗免疫原性的研究[D];华中科技大学;2007年

4 郭萍;血吸虫Sj14FABP和Sj26GST双价膜锚定表达DNA疫苗pIRES-Sj26-Sj14的构建和表达[D];华中科技大学;2006年

本文编号：2887547