内蒙古地区结核分枝杆菌临床分离株分子分型研究

发布时间：2017-04-06 15:13

  本文关键词：内蒙古地区结核分枝杆菌临床分离株分子分型研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 对内蒙古自治区结核分枝杆菌临床分离株进行分子分型研究，了解该地区结核分枝杆菌临床分离株的基因型构成、主要流行株及其相关传播流行特征，进而为该地区结核病防治提供一定的基础科学依据。 方法： 1.于2011年1月至2012年6月收集内蒙古自治区结核病防治所从临床诊断为结核病的病人分离获得的500株分枝杆菌临床分离株及其背景资料和标准菌株H37Rv（ATCC27294），均由中国疾病预防控制中心传染病预防控制所结核病实验室保藏并提供本研究使用。 2.采用L-J培养基常规培养，收集菌体，提取全基因组DNA用于菌种鉴定和基因分型。 3.用多位点PCR鉴定菌种。 4.分别采用21MIRU-VNTR位点的多位点串联重复序列分析（MLVA）和间隔寡核苷酸分型（Spoligotyping）两种基因分型方法对已鉴定为结核分枝杆菌的临床分离株进行基因分型研究，同时应用BioNumerics5.0软件对分型结果进行聚类分析，，并将Spoligotyping分型结果与国际SpolD4.0数据库进行比对，而其中的北京家族菌株的遗传特征则应用核转录因子（nuclear transcription factorsor neuronot，NTF）和大片段多态性（large sequence polymorphism，LSP）进一步分析探讨。 5.采用SPSS13.0统计学软件、卡方检验（χ2test）分析内蒙古地区北京家族菌株与主要民族、性别、年龄、结核病类型及病例类型间的关系，从而探讨该地区北京家族菌株的流行传播机制。P≤0.05差异有统计学意义。 结果： 1.共收集500株分枝杆菌分别分离于500例临床诊断为结核病患者的痰标本。经多位点PCR鉴定，482株为结核分枝杆菌（MTB），用于进一步基因分型研究；另外18株为非结核分枝杆菌（NTM）。 2.采用MLVA方法对482株结核分枝杆菌的21个VNTR位点进行检测，及BioNumerics软件进行聚类，可分为349个VNTR基因型，其中279株菌表现为独特基因型，203株表现为70簇，分别含有2或2株以上的菌株。成簇率为27.59%。 3.经Spoligotyping分型，482株菌呈现出52个基因型，其中35株菌表现有独特基因型，其余447株菌成簇分别为17个基因型。其北京家族菌株为主要流行株，所占比率达到86.72%（418/482）。 4. NTF分析北京家族菌株显示，69.62%（291/418）菌株表现为在NTF区存在1～2个IS6110的插入，称之为“现代型”，剩下30.38%（127/418）菌株表现为NTF区完整，即属于“古典型”。 5. LSP中RD105的分析结果与Spoligotyping分型结果一致，在RD105表现缺失的418株结核分枝杆菌，在Spoligotyping分型中的35到43间隔区存在3～9个杂交，即表现为北京家族。然而，RD181分析表现为6.46%（27/418）的菌株中RD181完整，93.54%（391/418）的菌株中RD181缺失。这27株（21.26%，27/127）RD181完整的北京家族菌株在NTF都表现为“古典型”，但其余100株（78.74%，100/127）“古典型”北京家族菌株表现为RD181缺失。 6. MLVA和Spoligotyping的比较，MLVA分辨率明显高于Spoligotyping，而Spoligotyping对北京家族的鉴定有利于MLVA进一步对该家族进行株水平的分析。 7.内蒙古地区北京家族菌株与主要民族、性别、年龄、结核类型及病例类型间的关系分析，差异均无统计学意义（均为P＞0.05）。 结论： 1.内蒙古地区结核分枝杆菌临床分离株存在明显的基因多态性，且北京家族为该地区的主要流行株。 2. RD105与Spoligotyping二者鉴定北京家族菌株的能力一致。北京家族菌株中“现代型”占主要，且RD181的分析显示其缺失发生早于NTF区IS6110的插入。 3.内蒙古地区北京基因型菌株的传播在主要民族、不同的年龄段、性别、结核病类型及病例类型中的差异均无统计学意义，因此未能证明北京家族菌株在该地区的流行传播与上述因素相关。 4. MLVA和Spoligotyping联合应用，对结核分枝杆菌进行株水平鉴定的能力明显增强。
【关键词】：结核分枝杆菌 基因分型 MLVA Spoligotyping 北京家族
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R378.911
【目录】：

• Abbreviation（缩略词）4-5
• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 前言10-12
• 材料和方法12-22
• 实验材料12-14
• 实验方法14-22
• 实验结果22-45
• 多位点 PCR 鉴定结核分枝杆菌22-23
• 结核分枝杆菌 MLVA 分析结果23-39
• 间隔区寡核苷酸分型分析39-40
• NTF 和 LSP 分析北京家族菌株40-42
• 北京家族菌株与民族、性别、年龄、结核类型及病例类型的关系42-45
• MLVA 分型方法与 Spoligotyping 分型方法之间的比较45
• 讨论45-50
• 结论50-51
• 附录51-66
• 参考文献66-70
• 本研究基金资助项目70-71
• 已发文章71-72
• 文献综述72-86
• 参考文献80-86
• 致谢86

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 华裕忠,陈敏,江国峰;噬菌体裂解法快速检测痰中结核分枝杆菌的研究[J];齐鲁医学检验;2005年04期

2 裴德翠;王淑兰;王湘;王金勇;王娅;;结核分枝杆菌临床分离株耐药性分析[J];现代预防医学;2007年08期

3 刘文娟;周冰;王倩;;噬菌体快速培养在肺内、肺外结核分枝杆菌感染诊断中的应用[J];实用临床医药杂志;2007年07期

4 贺素典;郭继丰;;结核分枝杆菌耐药性不同检测方法的比较与评价[J];中国当代医药;2009年03期

5 王秀丽;曾绍艺;汪远红;;氟喹诺酮类药治疗耐药肺结核的效果[J];中国热带医学;2009年02期

6 戚超群;杨贵发;;结核分枝杆菌培养快速烟酸测定法的研究[J];社区医学杂志;2008年09期

7 张国庆;付玉军;田巧;;斑点金免疫渗滤法检测结核分枝杆菌抗体在肺结核诊断中的应用[J];中国医药导报;2008年08期

8 范建华;高博;黄金宝;;口岸卫生检疫中开放性肺结核检测模式的探讨[J];口岸卫生控制;2006年01期

9 薛卉;杨育波;孙莹;张东;;类固醇性结核病39例临床分析[J];中国城乡企业卫生;2011年02期

10 李晓非;熊俊辉;汪亚玲;朱莉莉;吕松琴;张军;;结核分枝杆菌相关γ-干扰素体外释放试验在结核病诊断中的应用价值[J];临床检验杂志;2011年05期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 许优;王勃;;噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌在诊断肺结核中的价值[A];中华医学会2008年全国结核病学术会议论文汇编[C];2008年

2 王勃;许优;;结核杆菌蛋白芯片检测对肺结核诊断的价值[A];中华医学会2008年全国结核病学术会议论文汇编[C];2008年

3 魏成宽;郑永利;陈松峰;于红梅;王林;肖军;高峰;;化疗下肺结核切除病灶和术前痰结核菌检出情况的对比研究(摘要)[A];中华医学会第六届全国结核病学术大会论文汇编[C];2000年

4 肖和平;;结核分枝杆菌耐氟喹诺酮类药物的严重性及其特点[A];中华医学会2008年全国结核病学术会议论文汇编[C];2008年

5 赵亭;丁北川;王u&民;;结核分枝杆菌抗体(IgG)检测在结核病诊断中的应用价值及意义探讨[A];中华医学会2008年全国结核病学术会议论文汇编[C];2008年

6 丁黎平;谷穗;;肺结核复发一例[A];全国复治肺结核诊断与治疗进展研讨会论文汇编[C];2007年

7 朱明利;;荧光定量PCR检测血及痰培养物中结核杆菌DNA及其临床应用[A];2009年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2009年

8 戴利成;钱福初;钟婧;王伟洪;沈轶群;何建方;李栋立;;结核分枝杆菌γ-干扰素体外释放实验在肺结核和肺外结核诊断中的应用[A];2011新型疫苗与抗体创制关键技术及质量控制研讨会论文集[C];2011年

9 邱丽华;邓云峰;岳淼;周洪顺;王立华;郝金拄;王海英;刘志敏;;以ESAT-6、CFP-10为基础的ELISPOT试验、血清TB-SA抗体检测、PPD试验在肺结核诊断中应用价值研究[A];中华医学会2008年全国结核病学术会议论文汇编[C];2008年

10 李国保;刘智;陈涛;张红梅;魏奇峰;蔡雄茂;;艾滋病并肺结核临床分析[A];中国防痨协会临床委员会、中国防痨协会基础委员会学术研讨会论文集[C];2008年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 本报记者 邱爽;结核病依然严重威胁人类健康[N];保健时报;2008年

2 中国疾病预防控制中心结核病预防控制中心主任 周林;如何预防肺结核[N];光明日报;2008年

3 记者 周芳;肺结核 尚未远去的阴影[N];吉林日报;2006年

4 中国消费者报 唐夏;五原则帮您治愈肺结核[N];中国消费者报;2006年

5 本报记者　 蔚宁;肺结核致死率超过SARS[N];珠海特区报;2006年

6 高轶鹏;结核流行广泛 控制从我做起[N];平顶山日报;2007年

7 记者 周哲 通讯员 项征国;肺结核重现“不治之症”危机[N];湖北科技报;2006年

8 本报记者 侯彦昌;阻止“白色瘟疫”卷土重来[N];菏泽日报;2006年

9 黄显斌;肺结核的治疗原则[N];中国中医药报;2007年

10 本报记者 潘魏;点燃生命的希望[N];喀什日报(汉);2007年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 董海燕;中国13省市结核分枝杆菌基因多态性分析[D];中国疾病预防控制中心;2011年

2 刘凯;结核分枝杆菌潜伏感染者和初发结核病患者免疫分子标识的筛选[D];北京协和医学院;2010年

3 徐广宇;基于生物信息学的结核分枝杆菌分子流行病学调查及诊断靶标簇系统平台的建立[D];吉林大学;2013年

4 陈嘉臻;结核分枝杆菌特异的RD2/RD11蛋白应用于结核免疫诊断的研究[D];复旦大学;2009年

5 宋文刚;茜草素抗结核分枝杆菌作用机制的蛋白质组学研究[D];吉林大学;2007年

6 王平;肺分枝杆菌感染临床特征、耐药模式、预后研究及肺组织结核分枝杆菌巢式PCR检测[D];北京协和医学院;2011年

7 陈颖钰;结核病新型分子标识的筛选及其在诊断和疫苗中的应用[D];华中农业大学;2010年

8 沈国妙;结核病复发及结核分枝杆菌耐药机制的研究[D];复旦大学;2006年

9 石荔;西藏自治区结核分枝杆菌临床分离菌株的基因分型初步研究[D];四川大学;2007年

10 陈建;结核患者社会行为因素和结核分枝杆菌基因分型的初步研究[D];四川大学;2007年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 徐亚军;分子信标荧光定量PCR快速检测结核分枝杆菌技术及产品的开发[D];四川大学;2007年

2 余琴;内蒙古地区结核分枝杆菌临床分离株分子分型研究[D];南华大学;2013年

3 杨彩娥;结核分枝杆菌利福平依赖株的遗传稳定性和蛋白质组学初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年

4 方仁东;上海地区结核分枝杆菌多重感染研究[D];西南大学;2008年

5 文建强;甘肃省结核分枝杆菌临床分离株基因分型初步研究[D];兰州大学;2008年

6 胡志东;结核分枝杆菌膜蛋白Rv0849功能和免疫学特性的研究[D];河南工业大学;2010年

7 高雪;结核分枝杆菌FurA的基因表达及单克隆抗体的制备[D];第四军医大学;2005年

8 曾林子;结核分枝杆菌免疫优势抗原蛋白PPE68的制备及血清学诊断的研究[D];四川大学;2007年

9 王均;儿童结核病结核分枝杆菌PE_PGRS33基因变异特点研究[D];重庆医科大学;2011年

10 蔡溢;结核分枝杆菌RmlA的表达、纯化以及酶促反应动力学研究[D];大连医科大学;2006年

  本文关键词：内蒙古地区结核分枝杆菌临床分离株分子分型研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：289105