淋巴管内皮细胞粘附分子的表达及其在体外淋巴管新生中的作用

发布时间：2020-11-20 18:57

　　 目的 研究粘附分子 PECAM-1、ICAM-3、VCAM-1 和 CD44 在组织淋巴管 内皮和培养 LECs 的表达,通过建立体外三维淋巴管形成模型,研究内皮粘附分 子在 LECs 增殖、迁移和管样结构形成中的作用。方法 取狗的空肠和腹前壁皮 肤,作冰冻切片,用免疫组织化学染色法标记粘附分子在组织淋巴管内皮的表达。 分离和培养狗胸导管的 LECs,用免疫荧光染色法标记粘附分子在 LECs 的表达, 在共聚焦激光扫描显微镜下观察。用图像分析系统分析粘附分子表达的 OD 值, 并与 TNF-α或 LPS 刺激细胞的表达进行比较。内皮细胞用 TNF-α或 LPS 刺激后, 分别阻断 PECAM-1、ICAM-3 和 CD44,计数细胞增殖数目和计算细胞迁移率。 制备体外三维Ⅰ型胶原蛋白凝胶淋巴管形成模型,阻断 PECAM-1、ICAM-3 和 CD44 后,观察管样结构的形成,测量管样结构的长度和面积,并在透射电镜下 观察其特征。 结果 小肠和皮肤内的淋巴管内皮 PECAM-1 和 ICAM-3 呈免疫 反应阳性。培养的 LECs 表达 PECAM-1、ICAM-3 和 CD44,不表达 VCAM-1。 用 TNF-α刺激 LECs 后,PECAM-1 和 ICAM-3 表达的 OD 值与正常对照组无明 显差别,CD44 的 OD 值低于正常对照组。用 LPS 刺激细胞后,PECAM-1、ICAM-3 和 CD44 表达的 OD 值均无显著性变化。用 TNF-α或 LPS 刺激细胞后,VCAM-1 呈弱表达。在对照组以及 TNF-α和 LPS 刺激组,阻断 PECAM-1 或 CD44 后,细 胞的增殖数目降低,但阻断 ICAM-3 后细胞的增殖数目无明显变化。分别阻断 PECAM-1、ICAM-3 和 CD44 后,内皮细胞的迁移率降低,管样结构的长度和面 积减少。在半薄和超薄切片上,LECs 形成的管状结构具有毛细淋巴管的形态特 征。结论 粘附分子 PECAM-1、ICAM-3、CD44 和 VCAM-1 在组织内淋巴管内 皮和培养 LECs 的表达不一致。用 TNF-α或 LPS 刺激后,培养 LECs 不同粘附分 子的表达变化也不相同。PECAM-1、ICAM-3 和 CD44 参与了体外 LECs 的增殖、 迁移和管腔形成等淋巴管新生过程。
【学位单位】：复旦大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2004
【中图分类】：R329
【部分图文】：

15图 1 PECAM-1 和 ICAM-3 在狗小肠和皮肤淋巴管内皮的表达。小肠绒毛纵断面（1A）和横断面（1B）中央乳糜管的内皮以及皮肤的淋巴管内皮（1E）均呈 PECAM-1 免疫反应阳性。中央乳糜管的内皮（1C）和皮肤的淋巴管内皮（1F）也呈 ICAM-3 免疫反应阳性。在标记 ICAM-3（1C）的连续切片上，淋巴管内皮也表达 VEGFR-3（1D）。↑ 示淋巴管内皮。ABC 染色。1A × 100，1B ~ 1F × 200

16图 2 胸导管内皮细胞的相差倒置显微镜照片。原代培养 24 h 后，细胞呈簇分布（2A）细胞形成单层时呈特征性的卵石状形态（2B）。 2A× 400，2B × 100

17图 3 培养 LECs 的Ⅷ因子相关抗原和 VEGFR-3 的表达。细胞表达内皮的特异性因子相关抗原（3A）和淋巴管内皮的特异性标记物 VEGFR-3（3B）。免疫荧光染色
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本文编号：2891846