DENV-2作用于HUVECs和人巨噬细胞对黏附分子表达的影响
发布时间：2020-12-10 17:46
目的:研究登革Ⅱ型病毒（DENV-2）感染人脐静脉内皮细胞（HUVECs）和人巨噬细胞,且感染后共培养对主要黏附分子表达的影响。方法:水平密度梯度离心法提取浓缩白细胞中的外周血单核细胞（PBMC）,贴壁分离单核细胞,用巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）刺激5～7 d,流式细胞术鉴定细胞表面CD14和CD11b分子。用103 TCID50 DENV-2分别感染HUVECs和人巨噬细胞,且感染后两者共培养,qRT-PCR检测细胞内不同时间点DENV NS1、VCAM-1、ICAM-1和E-selectin mRNA相对表达量。双抗体夹心ELISA法分别检测不同时间点各组培养上清液中可溶性分子ICAM-1、VCAM-1和E-selectin的表达水平变化。结果:流式细胞术鉴定人巨噬细胞纯度为（92.15±1.24）%。DENV-2感染HUVECs后病毒基因NS1的相对表达量呈先升后降趋势,在24 h达到峰值后下降,DENV-2感染人巨噬细胞的DENV NS1基因相对表达量呈先递减后增加趋势,共培养组HUVECs的NS1 mRNA各时间点表达水平均高于HUVECs单独感染...
【文章来源】：中国免疫学杂志. 2019年15期 第1802-1807页 北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
DENV-2部分序列扩增Fig．1PartialsequenceamplificationofNS1
经刺激因子衍生为巨噬细胞，经流式细胞仪鉴定纯度为(92.15±1.24)%(图2)。2.3qRT-PCR检测不同时间点HUVECs和巨噬细胞及共培养后HUVECs中病毒载量DENV-2感染HUVECs后，NS1mRNA相对表达量呈先增加后降低趋势(图3A)，24h(1.25±0.16)达峰值且比4h感染组增加了(1.44±0.17)倍(P＜0.05)。DENV-2感染巨噬细胞后，NS1mRNA相对表达量呈先递减后增加趋势(图3B)。感染的HUVECs与感染的巨噬细胞共培养，其HUVECs的NS1mRNA相对表达量均高于相应时间点HUVECs单独感染组，在24h(19.78±2.63，P＜0.0001)、48h(10.67±0.65，P＜0.0001)显著上调(图4)。2.4qRT-PCR检测不同时间点DENV-2感染的巨噬细胞中ICAM-1、VCAM-1和E-selectinmRNA相对表达量DENV-2感染巨噬细胞后，ICAM-1mRNA相对表达量于4h(2.09±0.01，P＜0.0001)、8h(2.04±0.01，P＜0.0001)高于巨噬细胞未感染组，图2流式细胞术检测M-CSF刺激后巨噬细胞的比例Fig．2Flowcytometrytodetectproportionofmacroph-agesinducedbyM-CSFNote:A.Unstainedcells;B.Stainedcells.图3NS1mRNA不同时间点相对表达量Fig．3NS1mRNArelativeexpressioninHUVECsandmacrophagesatdifferenttimeNote:A.NS1mRNAinHUVECs;B.NS1mRNAinmacropha-ges.Comparedwithuninfectedgroupatthecorrespondingtime，#.P＜0.05，##.P＜0.01，###.P＜0.001，####.P＜0.0001;com-paredwithinfectedgroupof4h，＊＊.P＜0.01，＊＊＊＊.P＜0.001.12h(0.92±0.03)、24h(1.03±0.01)?
.0001)、48h(10.67±0.65，P＜0.0001)显著上调(图4)。2.4qRT-PCR检测不同时间点DENV-2感染的巨噬细胞中ICAM-1、VCAM-1和E-selectinmRNA相对表达量DENV-2感染巨噬细胞后，ICAM-1mRNA相对表达量于4h(2.09±0.01，P＜0.0001)、8h(2.04±0.01，P＜0.0001)高于巨噬细胞未感染组，图2流式细胞术检测M-CSF刺激后巨噬细胞的比例Fig．2Flowcytometrytodetectproportionofmacroph-agesinducedbyM-CSFNote:A.Unstainedcells;B.Stainedcells.图3NS1mRNA不同时间点相对表达量Fig．3NS1mRNArelativeexpressioninHUVECsandmacrophagesatdifferenttimeNote:A.NS1mRNAinHUVECs;B.NS1mRNAinmacropha-ges.Comparedwithuninfectedgroupatthecorrespondingtime，#.P＜0.05，##.P＜0.01，###.P＜0.001，####.P＜0.0001;com-paredwithinfectedgroupof4h，＊＊.P＜0.01，＊＊＊＊.P＜0.001.12h(0.92±0.03)、24h(1.03±0.01)、48h(0.97±0.04)、72h(0.84±0.06)相对表达水平与未感染组相比差异无统计学意义(图5A)，E-selectinmRNA相对表达量于4h(5.65±1.51，P＜0.0001)明显高于未感染组，8h(1.45±0.21)与未感染组相比表达量相比差异无统计学意义，12h(0.15±0.03)、24h(0.14±0.04)、48h(0.19±0.06)、72h(0.24±0.09)与未感染组相比表达量下调(图5B)，但未检测到VCAM-1mRNA的表达。2.5qRT-PCR检测不同时间点HUVECs中ICAM-1、VCAM-1和E-selectinmRNA相对表达量DENV-2感染HUVECs后，各时间点ICAM-1?
本文编号：2909112
【文章来源】：中国免疫学杂志. 2019年15期 第1802-1807页 北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
DENV-2部分序列扩增Fig．1PartialsequenceamplificationofNS1
经刺激因子衍生为巨噬细胞，经流式细胞仪鉴定纯度为(92.15±1.24)%(图2)。2.3qRT-PCR检测不同时间点HUVECs和巨噬细胞及共培养后HUVECs中病毒载量DENV-2感染HUVECs后，NS1mRNA相对表达量呈先增加后降低趋势(图3A)，24h(1.25±0.16)达峰值且比4h感染组增加了(1.44±0.17)倍(P＜0.05)。DENV-2感染巨噬细胞后，NS1mRNA相对表达量呈先递减后增加趋势(图3B)。感染的HUVECs与感染的巨噬细胞共培养，其HUVECs的NS1mRNA相对表达量均高于相应时间点HUVECs单独感染组，在24h(19.78±2.63，P＜0.0001)、48h(10.67±0.65，P＜0.0001)显著上调(图4)。2.4qRT-PCR检测不同时间点DENV-2感染的巨噬细胞中ICAM-1、VCAM-1和E-selectinmRNA相对表达量DENV-2感染巨噬细胞后，ICAM-1mRNA相对表达量于4h(2.09±0.01，P＜0.0001)、8h(2.04±0.01，P＜0.0001)高于巨噬细胞未感染组，图2流式细胞术检测M-CSF刺激后巨噬细胞的比例Fig．2Flowcytometrytodetectproportionofmacroph-agesinducedbyM-CSFNote:A.Unstainedcells;B.Stainedcells.图3NS1mRNA不同时间点相对表达量Fig．3NS1mRNArelativeexpressioninHUVECsandmacrophagesatdifferenttimeNote:A.NS1mRNAinHUVECs;B.NS1mRNAinmacropha-ges.Comparedwithuninfectedgroupatthecorrespondingtime，#.P＜0.05，##.P＜0.01，###.P＜0.001，####.P＜0.0001;com-paredwithinfectedgroupof4h，＊＊.P＜0.01，＊＊＊＊.P＜0.001.12h(0.92±0.03)、24h(1.03±0.01)?
.0001)、48h(10.67±0.65，P＜0.0001)显著上调(图4)。2.4qRT-PCR检测不同时间点DENV-2感染的巨噬细胞中ICAM-1、VCAM-1和E-selectinmRNA相对表达量DENV-2感染巨噬细胞后，ICAM-1mRNA相对表达量于4h(2.09±0.01，P＜0.0001)、8h(2.04±0.01，P＜0.0001)高于巨噬细胞未感染组，图2流式细胞术检测M-CSF刺激后巨噬细胞的比例Fig．2Flowcytometrytodetectproportionofmacroph-agesinducedbyM-CSFNote:A.Unstainedcells;B.Stainedcells.图3NS1mRNA不同时间点相对表达量Fig．3NS1mRNArelativeexpressioninHUVECsandmacrophagesatdifferenttimeNote:A.NS1mRNAinHUVECs;B.NS1mRNAinmacropha-ges.Comparedwithuninfectedgroupatthecorrespondingtime，#.P＜0.05，##.P＜0.01，###.P＜0.001，####.P＜0.0001;com-paredwithinfectedgroupof4h，＊＊.P＜0.01，＊＊＊＊.P＜0.001.12h(0.92±0.03)、24h(1.03±0.01)、48h(0.97±0.04)、72h(0.84±0.06)相对表达水平与未感染组相比差异无统计学意义(图5A)，E-selectinmRNA相对表达量于4h(5.65±1.51，P＜0.0001)明显高于未感染组，8h(1.45±0.21)与未感染组相比表达量相比差异无统计学意义，12h(0.15±0.03)、24h(0.14±0.04)、48h(0.19±0.06)、72h(0.24±0.09)与未感染组相比表达量下调(图5B)，但未检测到VCAM-1mRNA的表达。2.5qRT-PCR检测不同时间点HUVECs中ICAM-1、VCAM-1和E-selectinmRNA相对表达量DENV-2感染HUVECs后，各时间点ICAM-1?
本文编号：2909112
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