ZHX3基因转染 BMSCs体外成骨能力的实验研究

发布时间：2017-04-08 06:02

  本文关键词：ZHX3基因转染 BMSCs体外成骨能力的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 探讨转录抑制因子—锌指蛋白和同源框3（zinc fingers and homeoboxes3，ZHX3）基因过表达对BMSCs体外成骨能力的影响。 方法 (1)原代培养大鼠BMSCs，观察细胞生长状态，流式细胞仪检测细胞表面标志CD34、CD29的表达情况。（2）采用ZHX3过表达慢病毒载体转染大鼠BMSCs，同时设空载病毒转染BMSCs组及未转染BMSCs组。MTT法观察转染后细胞生长状态，记录生长曲线。（3）采用荧光显微镜计数细胞转染率，并采用Westernblot检测ZHX3蛋白表达状况。（4）于体外培养，经定向成骨诱导14d后采用碱性磷酸酶和茜素红染色，观察各组细胞的成骨能力，并同时对三组细胞进行成脂诱导和成软骨诱导，后分别进行油红O染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色，观察ZHX3在BMSCs成脂和成软骨方面的作用。 结果 （1）贴壁法获得的细胞具有BMSCs表型。（2）转染后，，ZHX3过表达组和空载病毒转染组均表达绿色荧光，未转染组不表达荧光，且ZHX3过表达组ZHX3基因表达显著高于其它两组。（3）成骨诱导后，ZHX3过表达、空载病毒转染组和未转染组均可见碱性磷酸酶阳性表达的细胞。Kaplow评分显示前者阳性表达显著高于后两者（P0.05）。ZHX3过表达组、空载病毒转染组和未转染组均可见明显的矿化结节。前者矿化结节的数量和体积均大于后两组。（4）成脂诱导后，油红O染色显示三组细胞胞浆出现淡红色颗粒，个别细胞胞浆颗粒呈现红色，其胞浆内有脂质生成，但三组细胞间差异不大，说明ZHX3基因在BMSCs成脂方面没有明显的促进或抑制作用；成软骨诱导后，Ⅱ型胶原免疫组化染色显示三组细胞均表达Ⅱ型胶原，但是差异没有统计学意义。 结论 ZHX3基因过表达可促进BMSCs体外成骨能力。
【关键词】：ZHX3 基因 细胞转染 骨髓间充质干细胞 成骨
【学位授予单位】：辽宁医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 中文论著摘要4-6
• 英文论著摘要6-8
• 英文缩略语表8-9
• 前言9-10
• 实验材料与方法10-16
• 实验结果16-26
• 讨论26-28
• 结论28-29
• 参考文献29-34
• 本研究创新性的自我评价34-35
• 综述35-46
• 参考文献42-46
• 在校期间科研成绩46-47
• 致谢47-48
• 个人简介48-49

【共引文献】

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本文编号：292199