C1q/TNFα相关蛋白-1功能区的表达、纯化及生物活性分析

发布时间：2020-12-17 18:57

　　目的:利用大肠杆菌表达可溶性hCTRP1球状功能区蛋白并分析其生物活性。方法:重组质粒转化大肠杆菌BL21-codonplus（DE3）菌株、IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）诱导表达并纯化。结果:hCTRP1球状区蛋白实现在大肠杆菌中的高水平表达,利用镍亲合纯化和分子筛纯化到重组蛋白,重组蛋白在细胞和动物水平上都具有生物活性。结论:利用大肠杆菌表达系统高效制备了具有生物活性的hCTRP1球状功能区蛋白。 

【文章来源】：中国医院药学杂志. 2015年03期 北大核心

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

图１重组可溶性蛋白Ｔｒｘ－ｇＨ１的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析Ｍ：蛋白质分子量标准；１－３：经ＩＰＴＧ诱导的３个转化子菌体可溶性蛋白；４：未经ＩＰＴＧ诱导的转化子菌体可溶性蛋

蛋白的纯度最高（图２－Ａ所示）。纯化结果说明，利用镍亲合层析可以对Ｔｒｘ－ｇＨ１蛋白有效纯化。将３００ｍｍｏｌ·Ｌ－１咪唑洗脱的蛋白样品收集，利用曲拉通Ｘ－１１４除去内毒素后ＰＢＳ（磷酸盐缓冲液）透析并超滤浓缩，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５分子筛对重组蛋白进一步纯化，纯化蛋白ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果如图２－Ｂ所示，从图２－Ｂ可看出，２０μｇ蛋白在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果中看不到杂蛋白条带，说明经分子筛纯化后蛋白样品的纯度可以用于活性测试实验。图２重组蛋白Ｔｒｘ－ｇＨ１的纯化Ａ．镍亲合层析纯化重组蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析；Ｂ．分子筛纯化Ｔｒｘ－ｇＨ１蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析；Ｍ：蛋白质分子量标准；１：经分子筛纯化的蛋白Ｆｉｇ２ＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｏｆＴｒｘ－ｇＨ１Ａ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥａｎａｌｙｓｉｓｏｆＴｒｘ－ｇＨ１ｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙＮｉ－ＮＴＡａｆｆｉｎｉｔｙｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；Ｂ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｕｒｉｆｉｅｄＴｒｘ－ｇＨ１ｆｒｏｍＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５ｇｅｌｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｃｏｌｕｍｎ；Ｍ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｔａｎｄａｒｄｏｆｐｒｏ－ｔｅｉｎ；１：ｐｒｏｔｅｉｎｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙｇｅｌｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ３．３活性分析为确定表达纯化的Ｔｒｘ－ｇＨ１是否具有生物活性，表达产物刺激分化Ｃ２Ｃ１２细胞。ＷＢ结果表明，Ｔｒｘ－ｇＨ１可以特异激活Ａｋｔ磷酸化，而Ｔｒｘ蛋白不能激活Ａｋｔ信号通

【参考文献】：
期刊论文
[1]Characterization of the Expression of CTRP9, a Paralog of Adiponectin[J]. 黄子纹,崔婷,刘晶,庄源,孟庆航,陶李涛,李珍.  Tsinghua Science and Technology. 2008(04)



本文编号：2922526