毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）基因在链霉菌及大肠杆菌中的克隆表达研究

发布时间：2020-12-18 07:16

　　CTLA-4（cytotoxic T lymphocyte-associated protein or antige-4，毒性T淋巴细胞相关蛋白-4）是免疫球蛋白超家族成员之一。主要存在于激活的T细胞表面，多以二聚体形式存在，部分以单体形式存在。CTLA-4二聚体与B7具有高亲和力的受体—配基结合活性，结合力较CD28大150倍，是T细胞激活双信号模型中与CD28／B7共同发挥作用的重要的共刺激信号之一，目前被认为是一种天然免疫下调物质。在多种小鼠模型中已经证明阻断CD28／B7分子的共刺激信号，可抑制体液免疫、移植排斥、缓解自身免疫性疾病、阻断多种免疫反应。研究显示CTLA-4胞外片段与转染B7分子的CHO细胞能特异性结合、体外实验表明能与细胞表面B7形成免疫共沉淀、CTLA-4Ig对动物器官移植具有免疫抑制效应，上述结果为该片段用于临床治疗提供了有力证据。 我们通过PCR扩增获得CTLA-4cDNA片段。以含CTLA-4基因的质粒pE为模板，分别设计了能与链霉菌表达质粒及大肠杆菌表达质粒相匹配的引物，采用PCR方法扩增得到相应的CTLA-4片段，序列分析证明结果正确。 ... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

PCR扩增CTLA一4和vsi结果

图4重组质粒pCV酶切鉴定esrtietionenZymaticnaa】ysisofhteereombninatPd2.四C18川as面d3.PCV旧amHI+EcoRI.4PC乃汤al+EeoRI6M田爪erP7CV尼eoRJ8.UPC1启动子前230bp的vsi一CTLA一4的融合C12的构建SC(包含vsi双启动子前230bp及s+/一质粒，由比利时鲁文大学Anne’教酶补平，环ndm酶切后可作为外源基PS一P6为引物，pcT为模板，PCR扩Eoc租酶切，Klneow酶补平，Hindm酶接处如图所示。CAGGCC*G森G*GCCAATTCTGCAA的重组质粒命名为pBSC12，酶切分析经Drall汗五ndlll双酶切可得到454bp和

预期连接处如图所示。ACCGCGCAGGCC*G森G*GCCAATTCTGCAAl，GCACGTG由此得到的重组质粒命名为pBSC12，酶切分析结果如图5所示。原质粒pBSC经Drall汗五ndlll双酶切可得到454bp和3500bp片段，


本文编号：2923599