20-HETE对心肌缺血再灌注损伤及细胞凋亡的作用及机制研究

发布时间：2020-12-18 10:01

　　20-羟二十烷四烯酸（20-hydroxyeicosatetraenoic acid,20-HETE）是由细胞色素P-450（CYP450）ω-羟化酶催化花生四烯酸生成的产物。研究认为，20-HETE可通过激活L-型钙通道并抑制钙依赖钾通道从而增强血管平滑肌的收缩，有效地调节肾、脑等小动脉血管的紧张度，被认为具有很强的收缩血管作用。20-HETE在血管平滑肌方面的研究已经得到广泛开展，但对心脏的作用及机制的研究少有报道。本文从如下几个方面探究了20-HETE对心脏功能的影响以及机制：第一部分20-HETE对大鼠心肌细胞L-型钙通道作用机制研究有研究表明，心肌缺血再灌注中20-HETE含量增加，抑制其生成可减少心肌损伤，但分子细胞机制尚不清楚。该部分研究的目的是在细胞水平揭示20-HETE对心肌的作用机制。首先，应用膜片钳技术研究了20-HETE对大鼠心肌细胞L-型钙通道的作用，发现20-HETE浓度依赖式的增强L-型钙电流，这种作用可被NADPH氧化酶特异性抑制剂gp91ds-tat或超氧化物歧化酶所抑制，提示NADPH氧化酶诱导生成的超氧化物参与了20-HETE激活L-型钙通道的作用... 

【文章来源】：东北师范大学吉林省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：93 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
    一、20-HETE在机体内合成途径及调节
    二、20-HETE的生理、病理作用及机制
        1. 20-HETE在调节血管紧张度中的作用及机制
        2. 20-HETE对肾脏功能的调节作用
        3. 20-HETE作为细胞内第二信使及参与促细胞有丝分裂作用
        4. 20-HETE与NO之间的交互作用关系
        5. 20-HETE其他生理、病理作用
    三、20-HETE对心脏功能的影响及我实验室相关研究
        1. 20-HETE在心肌缺血再灌注损伤中的作用
        2. 本实验室相关研究
    四、本研究的背景、内容及研究目标
        1. 研究背景
        2 研究内容
        3 研究目标
第一章 20-HETE对大鼠心肌细胞L-型钙通道作用机制研究
    摘要
    一、引言
    二、材料与方法
        1. 实验动物与药品
        2. 成年大鼠心肌细胞分离
        3. 膜片钳电生理记录
        4. 心肌细胞内ROS水平检测
        5. p47phox磷酸化水平检测
        6. PKC活性检测
    三、实验结果
        1. 20-HETE通过激活心肌细胞膜L-型钙通道增加ICa,L
        2. NADPH氧化酶及超氧化物介导 20-HETE增强L-型钙电流作用
        3. 20-HETE增加了心肌细胞中ROS的生成
        4. 20-HETE增强了心肌细胞中NADPH氧化酶活性
        5. PKC参与 20-HETE 激活NADPH氧化酶引起超氧化物的生成作用
        6. 20-HETE增加PKC活性及NADPH氧化酶的磷酸化水平
        7. 20-HETE通过PKC依赖性机制增加心肌细胞L-型钙电流作用
    四、讨论
第二章 20-HETE在心肌缺血再灌注损伤中的作用及机制研究
    摘要
    一、引言
    二、材料与方法
        1. 实验动物与药品
        2. 大鼠离体心肌缺血再灌注模型建立
        2. 缺血再灌注实验方案
        3. 心梗面积测定
        4. 心肌细胞凋亡检测
        5. 心肌ROS水平测定
        6. 蛋白质过氧化水平检测
        7. qRT-PCR方法检测p22phox和gp91phoxmRNA表达
        8. Western Blot检测p22phox和gp91phox蛋白表达
        9. NADPH氧化酶活性检测
        10. 心肌组织过氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性检测
    三、实验结果
        1. HET0016 减弱了 20-HETE诱导的加重缺血再灌注后心肌功能的下降
        2. HET0016 抑制了 20-HETE诱导的缺血再灌注后心肌梗死面积增加
        3. HET0016 抑制了 20-HETE诱导的缺血再灌注后心肌细胞凋亡作用
        4. HET0016 和 20-HETE对缺血再灌注诱发ROS生成及蛋白质过氧化的影响
        5. HET0016 和 20-HETE对缺血再灌注后心肌组织SOD和catalase活性的影响
        6. 20-HETE增加了再灌注后NADPH氧化酶亚基的表达和活性增强
        7. 20-HETE通过PKC依赖机制激活NADPH氧化酶
        8. Apocynin和Tempol减弱了 20-HETE诱导的缺血再灌注后心肌功能的下降
    四、讨论
第三章 20-HETE介导血管紧张素II诱导的心肌细胞凋亡研究
    摘要
    一、引言
    二、材料与方法
        1. 实验动物与药品
        2. 原代乳鼠心肌细胞分离及培养
        3. FITC-annexin V与PI双染法测定心肌细胞凋亡
        4. 高效液相色谱分析检测 20-HETE含量
        5. 心肌细胞线粒体膜电位（ΔΨm）检测
        6. 心肌细胞中ROS含量测定
        7. Real-time RT-PCR方法检测CYP4A1mRNA和蛋白表达
    三、实验结果
        1. Ang II促进培养的乳鼠心肌细胞凋亡
        2. Ang II增加心肌细胞内 20-HETE生成
        3. HTE0016 对Ang II诱导的细胞凋亡的作用
        4. HET0016 抑制Ang II和 20-HETE诱导的线粒体膜电位下降
        5. HET0016 抑制Ang II和 20-HETE诱导的ROS过量生成
        6. Ang II促进心肌细胞内CYP4A1 表达
    四、讨论
第四章 20-HETE通过δPKC对大鼠心肌细胞L-型钙通道和全细胞钾通道电流及心肌力学的作用研究
    摘要
    一、引言
    二、材料与方法
        1. 实验动物与药品
        2. 大鼠离体心肌力学测定
        3. 成年大鼠心肌细胞分离
        4. 膜片钳电生理记录
        5. 统计方法
    三、实验结果
        1. δPKC抑制剂卡马拉素阻断了 20-HETE诱导的L-型钙通道电流增强作用
        2. 卡马拉素阻断了 20-HETE对全细胞钾通道电流的抑制作用
        3. 卡马拉素阻断了 20-HETE诱导的心肌力学指标的下降
    四、讨论
结论
创新点
参考文献
附录
致谢
在学期间公开发表论文及著作情况


【参考文献】：
期刊论文
[1]20-羟二十烷四烯酸在机体生理及病理调节中的作用[J]. 张迪,霍洪亮,张英妮,曾庆华.  生理科学进展. 2007(02)



本文编号：2923809