TCF4/β-catenin调控间充质干细胞向HGF的趋化性迁移
发布时间：2020-12-19 19:49
组织损伤或神经系统疾病严重影响着人类的生命健康和生活质量，移植外源性干细胞修复受损部位或重塑神经组织是目前治疗这些疾病的主要策略，但神经干细胞（neural stem cells, NSCs）或胚胎干细胞（embryonic stem cell, ESCs）由于来源和伦理等问题不能被广泛应用于干细胞移植。间充质干细胞（mesenchymalstem cells, MSCs）是一类多潜能成体干细胞，因其具有来源广泛、体外增殖快和免疫原性弱等优势，迅速成为理想的组织工程种子细胞。体内外实验证实MSCs可以沿着趋化因子（HGF、VEGF、SDF）浓度梯度的方向向损伤部位迁移，修复受损的组织，但是关于细胞迁移的具体调控机制目前尚不清楚。Wnt/β-catenin信号通路不仅影响肿瘤的发生发展和转移，对干细胞的增殖、分化和迁移同样具有重要的调控作用。研究发现许多细胞因子如HGF、VEGF等可以激活Wnt/β-catenin信号通路，影响细胞的分化和迁移，此过程中没有Wnt蛋白的参与。本文旨在研究肝细胞生长因子（HGF）诱导MSCs趋化性迁移过程中，Wnt/β-catenin信号通路的激活情况以及...
【文章来源】：苏州大学江苏省
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HGF对MSCs中β-catenin表达水平的影响
（0 min、30 min、60 min、120 min、240 min），通过免疫荧光染色检测 β-cate细胞中的定位情况，结果发现 HGF 处理 MSCs 30 min 时，胞质中出现了 β-cate累积，处理 60 min，细胞核内 β-catenin 积累明显，在处理的 240 min 内，β-cate有明显的出核或降解迹象（图 1-2A）。TOPFlash 质粒上含有萤火虫荧光素酶报告基因，可以催化底物产生生物荧光萤火虫荧光素酶基因的启动子上游含有 TCF/LEF 的结合序列，因此受 β-cate性的调控。FOPFlash 与 TOPFlash 的基本序列一致，只是 FOPFlash 质粒荧光启动子上游的 TCF/LEF 结合序列是突变的，不能结合 TCF/LEF，因OPFlash/FOPFlash 常被用做指示细胞或组织中 Wnt/β-catenin 信号通路的激活。在本实验中我们向 MSCs 转染 TOPFlash/FOPFlash 质粒，并同时共转染海肾素酶报告基因 RL-TK，用萤火虫荧光素值与海肾荧光素的比值（RLU）来指SCs 中 Wnt/β-catenin 信号的强度。通过检测，我们发现 50 ng/ml HGF 使 MS TOPFlash 报告基因的 RLU 值增加了 4 倍，而 FOPFlash 报告基因没有显著变化中 LiCl 作为阳性对照（图 1-2B）。
MSCs 向 HGF 的迁移过程。本实验室前期研究发现 HGF 诱导 MSCs 发生趋化性迁移，具有剂量依赖效应，最大诱导浓度为 50 ng/ml。在 Wnt/β-catenin 信号通路中，FH535 可以抑制 β-catenin 与 TCF/LEF 的结合，阻断 Wnt 信号的传导，因此被作为Wnt/β-catenin 信号通路的抑制剂。首先用不同浓度（0 μM、5 μM、10 μM、20 μM）的 FH535 预处理 MSCs 30 min，然后将处理的细胞加到 Boyden chamber 的上室，在下室加入 50 ng/ml HGF，并且上、下室同时加入相应浓度的 FH535，通过计数从上室迁移到膜下方的细胞数，研究 Wnt/β-catenin 信号通路对 MSCs 向 HGF 应答的影响。通过统计发现，与 L-DMEM 处理组相比，50 ng/ml HGF 能够明显增加MSCs 的迁移，验证了实验室之前所得结果，但是 FH535 的处理显著抑制了 MSCs向 HGF 的迁移，具有剂量依赖性，5 μM FH535 使细胞的迁移总数下降了 30%，而 20 μM FH535 使迁移下降超过了 50%（图 1-3）。此外，为了检测了 FH535 抑制MSCs 迁移的作用是否与细胞凋亡有关，我们用 50 ng/ml HGF 和不同浓度（0 μM、5 μM、10 μM、20 μM）的 FH535 处理 MSCs 4 h 后，发现细胞的数量没有明显变化，说明 FH535 抑制细胞迁移与细胞凋亡无关（结果未示）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Alterations of Lymphoid Enhancer Factor-1 Isoform Expression in Solid Tumors and Acute Leukemias[J]. Wenbing WANG Ping JI Bjrn STEFFEN Ralf METZGER Paul M.SCHNEIDER Hartmut HALFTER Mark SCHRADER Wolfgang E.BERDEL Hubert SERVE Carsten MLLER-TIDOW Institute of Life Sciences,Jiangsu University,Zhenjiang 212013.China;Hematology and Oncology.and Neurology,Department of Medicine,University of Mnster,D-48129 Mnster,Germany;Dematology of Visceral and Vascular Surgery,University of Cologne,D-50931 Cologne,Germany;Department of Urolooy,Free University Berlin,D-12200 Berlin.. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2005(03)
[2]Association of hTcf-4 gene expression and mutation with clinicopathological characteristics of hepatocellular carcinoma[J]. Ying Jiang Xin-Da Zhou Yin-Kun Liu Xin Wu Xiao-Wu Huang Liver Cancer Institute,Zhong Shah Hospital,Fudan University,Shanghai 200032,China. World Journal of Gastroenterology. 2002(05)
本文编号：2926473
【文章来源】：苏州大学江苏省
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HGF对MSCs中β-catenin表达水平的影响
（0 min、30 min、60 min、120 min、240 min），通过免疫荧光染色检测 β-cate细胞中的定位情况，结果发现 HGF 处理 MSCs 30 min 时，胞质中出现了 β-cate累积，处理 60 min，细胞核内 β-catenin 积累明显，在处理的 240 min 内，β-cate有明显的出核或降解迹象（图 1-2A）。TOPFlash 质粒上含有萤火虫荧光素酶报告基因，可以催化底物产生生物荧光萤火虫荧光素酶基因的启动子上游含有 TCF/LEF 的结合序列，因此受 β-cate性的调控。FOPFlash 与 TOPFlash 的基本序列一致，只是 FOPFlash 质粒荧光启动子上游的 TCF/LEF 结合序列是突变的，不能结合 TCF/LEF，因OPFlash/FOPFlash 常被用做指示细胞或组织中 Wnt/β-catenin 信号通路的激活。在本实验中我们向 MSCs 转染 TOPFlash/FOPFlash 质粒，并同时共转染海肾素酶报告基因 RL-TK，用萤火虫荧光素值与海肾荧光素的比值（RLU）来指SCs 中 Wnt/β-catenin 信号的强度。通过检测，我们发现 50 ng/ml HGF 使 MS TOPFlash 报告基因的 RLU 值增加了 4 倍，而 FOPFlash 报告基因没有显著变化中 LiCl 作为阳性对照（图 1-2B）。
MSCs 向 HGF 的迁移过程。本实验室前期研究发现 HGF 诱导 MSCs 发生趋化性迁移，具有剂量依赖效应，最大诱导浓度为 50 ng/ml。在 Wnt/β-catenin 信号通路中，FH535 可以抑制 β-catenin 与 TCF/LEF 的结合，阻断 Wnt 信号的传导，因此被作为Wnt/β-catenin 信号通路的抑制剂。首先用不同浓度（0 μM、5 μM、10 μM、20 μM）的 FH535 预处理 MSCs 30 min，然后将处理的细胞加到 Boyden chamber 的上室，在下室加入 50 ng/ml HGF，并且上、下室同时加入相应浓度的 FH535，通过计数从上室迁移到膜下方的细胞数，研究 Wnt/β-catenin 信号通路对 MSCs 向 HGF 应答的影响。通过统计发现，与 L-DMEM 处理组相比，50 ng/ml HGF 能够明显增加MSCs 的迁移，验证了实验室之前所得结果，但是 FH535 的处理显著抑制了 MSCs向 HGF 的迁移，具有剂量依赖性，5 μM FH535 使细胞的迁移总数下降了 30%，而 20 μM FH535 使迁移下降超过了 50%（图 1-3）。此外，为了检测了 FH535 抑制MSCs 迁移的作用是否与细胞凋亡有关，我们用 50 ng/ml HGF 和不同浓度（0 μM、5 μM、10 μM、20 μM）的 FH535 处理 MSCs 4 h 后，发现细胞的数量没有明显变化，说明 FH535 抑制细胞迁移与细胞凋亡无关（结果未示）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Alterations of Lymphoid Enhancer Factor-1 Isoform Expression in Solid Tumors and Acute Leukemias[J]. Wenbing WANG Ping JI Bjrn STEFFEN Ralf METZGER Paul M.SCHNEIDER Hartmut HALFTER Mark SCHRADER Wolfgang E.BERDEL Hubert SERVE Carsten MLLER-TIDOW Institute of Life Sciences,Jiangsu University,Zhenjiang 212013.China;Hematology and Oncology.and Neurology,Department of Medicine,University of Mnster,D-48129 Mnster,Germany;Dematology of Visceral and Vascular Surgery,University of Cologne,D-50931 Cologne,Germany;Department of Urolooy,Free University Berlin,D-12200 Berlin.. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2005(03)
[2]Association of hTcf-4 gene expression and mutation with clinicopathological characteristics of hepatocellular carcinoma[J]. Ying Jiang Xin-Da Zhou Yin-Kun Liu Xin Wu Xiao-Wu Huang Liver Cancer Institute,Zhong Shah Hospital,Fudan University,Shanghai 200032,China. World Journal of Gastroenterology. 2002(05)
本文编号：2926473
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