人源抗甲型肝炎病毒抗体基因的克隆及表达研究

发布时间：2020-12-22 18:00

　　抗体分子的研究及应用一直是免疫学乃至整个生物学研究的热点。在生物制品中，抗体类占了很大的份额，因此抗体工程的发展倍受人们的关注。抗体技术由最初的血清多克隆抗体发展到杂交瘤单克隆抗体技术，直到目前的基因工程抗体技术，尤其是噬菌体抗体库技术的出现，将抗体工程推到了一个新的发展阶段。甲型肝炎病毒(HAV)是危害人类健康的重要致病原之一，目前已有多种用于接触前预防的甲肝疫苗。但对于接触后预防或短期到HAV高流行区的旅游者的预防，则多采用免疫球蛋白作被动免疫。血源性免疫球蛋白虽然效价高，应用效果好，但可能被血源病原体污染，且浪费血源。因此基因工程人源抗体有望成为接触后预防的首选制剂。为此，我们用HAV的细胞培养抗原对已有的人源噬菌体抗体库进行筛选，获得了与HAV抗原有结合活性的噬菌体抗体，并改建成Fab及全分子抗体，并用不同的表达系统进行了表达。 一、人源抗HAV Fab基因的克隆及可溶性表达 用抗体捕获的HAV抗原对噬菌体抗体库进行三轮淘筛，筛选出与HAV抗原有特异性结合能力的抗体，并对其重、轻链基因进行了序列测定，分析表明重链Fd基因属IgG1亚类，轻链基因属κ亚类。在此基础上构... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：78 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

特异性噬菌体抗体竞争抑制性实验Fig.l一1ComPetitiveihnibitionELISAofPhgaenatibodies

诱导的细菌没有表达较大量的外源可溶性蛋白。而在包涵体部分，在相对分子量约25Dk的位置上出现两条带，表明有重组蛋白表达，表达产物主要以包涵体的形式存在(图2一4)。经薄层扫描分析，重组蛋白占包涵体蛋白总量的39.1%。将包涵体经变性复性后，经免疫印迹检测复性的可行性。按方法1.2.6，在透析过程中有大量的蛋白沉淀形成，但将透析后的产物离心取上清做免疫印迹时，未加还原剂的复性样品仅在48Dk左右出现一特异条带，而加还原剂后，在25Dk左右出现两条带(图2一5)。该结果表明:虽然在复性过程中会损失很多蛋白

Note:ArrowsindieatinghteexPressedProteins.12图2一5Fab蛋白复性的免疫印迹分析Fig.2一5RenaturationofFabProteinrenuaterdProducstofhteinelusionbodyrenuatredPorduesttreatedwithp一meerpatoehtnaol2.4Fab结合活性的检测结果用ELsIA分别检测培养上清、合活性(均以转化pASK84的JM83可溶性部分及复性产物与HAV抗原的结相应部分为阴性对照)，结果表明在培养上清、可溶性蛋白及复性产物中均存在与HAV抗原特异结合的Fba抗体，且结合活性良好(图2一6)。42

【参考文献】：
期刊论文
[1]携带共扩增基因的CHO细胞表达载体的构建[J]. 刘国奇,陈小密,徐静,宋宏彬,于长明,童贻刚,王海涛.  细胞与分子免疫学杂志. 2000(01)
[2]人噬菌体抗体库的构建和甲肝抗体的筛选[J]. 杜桂鑫,于长明,毛春生,王海涛.  中华微生物学和免疫学杂志. 2000(01)
[3]人源抗HAV噬菌体抗体的筛选及基因序列分析[J]. 于长明,杜桂鑫,毛春生,宋宏彬,徐志凯,王海涛.  中华肝脏病杂志. 1999(03)
[4]抗结肠癌抗体Fab片段在大肠杆菌中的表达[J]. 李启胜,俞炜源,王翔,袁枚,李力.  军事医学科学院院刊. 1999(01)
[5]人抗体组合文库的构建和抗HBsAg噬菌体抗体的筛选[J]. 王学,王海涛,陈万荣,徐静.  生物化学与生物物理学报. 1997(02)



本文编号：2932177