结核分枝杆菌广谱胁迫蛋白Rv2624c的功能研究

发布时间：2020-12-23 07:28

　　结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)是导致结核病的病原菌。全球约有三分之一的人口感染结核分枝杆菌,每年约有两百万人死于结核病,因此结核病成为严重威胁人类健康的疾病之一。据估计,人类感染结核分枝杆菌后,只有10%的感染能够转化为活动性肺结核；在其余90%的感染中,细菌在宿主肺部存留维持代谢休眠状态而进入潜伏感染期。结核分枝杆菌的潜伏感染在结核病发病机理中起非常重要的作用,但是目前相关的调节机制尚不明确。近年来已有研究证明结核分枝杆菌的广谱胁迫蛋白(Universal Stress Protein,USP)家族与潜伏感染有关,研究这类家族蛋白的功能,以期为结核分枝杆菌的潜伏感染研究提供一些线索。广谱胁迫蛋白是一种古老且保守的蛋白家族,当细菌处于环境压力胁迫情况下,比如营养物质缺乏,缺氧,NO胁迫,生长环境中有重金属离子等毒性物质存在,热休克以及DNA损伤等,该家族蛋白参与表达调控,有助于维持细菌在压力下存活。感染宿主的结核分枝杆菌被巨噬细胞吞噬后逐步形成肉芽肿,此时的结核分枝杆菌恰好就处于氧气、营养物质缺乏的压力环境中。结核分枝杆菌包含十个广谱胁迫蛋... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：103 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

结核分枝杆菌USP除Rvl028和Rv2319以外的蛋白按照序列特点分类

Volume (ml)图6: Rv2624c重组表达质粒构建及蛋白表达纯化。（A) Rv2624c-pQE80L重组质粒BamH I和EcoR I酶切鉴定结果，PQE80L箭头处是载体位置，n，2(52介箭头处是目的片段。（B)重组质粒转入表达菌株Rosetta中表达情况。Lane 1&2：未诱导的和加入丨PTG诱导的Rosetta总蛋白；Lane 3&4：加入IPTG诱导的Rv2624c表达菌株裂解后上清&沉淀；Lane 5:蛋白Marker,从上到下依次是 170、130、100、70、55、40、35、25 (kD) ； Lane 6&7：经亲和层析后Rv2624c纯蛋白考马斯亮蓝染色&WestemBlot鉴定，箭头所指处即目的蛋白所在位置。（C)分子量标准品的分子蹄凝胶层析图。（D) Rv2624c纯蛋白的分子蹄凝胶层析图。Fig6. (A) Construction of Rv2624c-pQE80L recombination DNA. (B) Expression and purificationof Rv2624c. Lanel to lane 6 is the coomassie brilliant blue dye. Lanel and Iane2 is thesupernatant and sediment of inductive Rosetta. Lane3 and lane4 is the supernatant and sed

具有ATP结合能力。将煮沸后的Rv2624c纯蛋白离心后取上清，通过离子交换层析与标准品（图7A)对比，证明纯化所得的蛋白中含有ATP，和少量ADP、AMP (图7B),而在细菌培养和纯化蛋白的过程中并没有加入外源的ATP，证明ATP是蛋白内源结合的，说明Rv2624c具有结合ATP的能力，即Rv2624c是一个ATP结合蛋白。同时检测出的ADP、AMP提示Rv2624c可能具有ATP酶活性。32


本文编号：2933318