高温热应激构建小鼠精原干细胞移植受体模型

发布时间：2020-12-23 21:42

　　目的:探讨高温热应激方法构建小鼠精原干细胞（SSCs）移植受体的可行性。方法:将4周龄的C57BL/6雄鼠和B6（Cg）-Tyrc-2J/J毛色基因纯合突变雄鼠置于恒温箱内,43℃热应激处理1 h,通过HE染色、免疫组化染色和TUNEL凋亡检测,寻找最佳移植时间;随后将SSCs移植入小鼠生精小管,定期观察移植后受体小鼠睾丸内SSCs增殖、分化及形成精子的情况,并将受体小鼠与正常同周龄雌鼠交配,观察其后代表观遗传学特征。结果:高温热应激3～5 d后受体小鼠睾丸生精小管内生精细胞层数减少,排列紊乱、疏松且大量缺失,间质细胞数量明显减少,生精细胞凋亡明显,自噬水平升高,12 d左右基本恢复。在分离纯化后的SSCs移植8周后,受体小鼠睾丸生精小管内分化形成生精细胞及具有遗传功能的精子,经过自然交配产生正常的后代。结论:高温热应激方法可快速、高效构建小鼠精原干细胞移植受体模型。 

【文章来源】：中华男科学杂志. 2019年09期 北大核心

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验动物
    1.2 方法
        1.2.1 构建高温热应激SSC移植受体小鼠
        1.2.2 样本采集
        1.2.3 HE染色
        1.2.4 免疫组化染色
        1.2.5 细胞凋亡检测
        1.2.6 Western印迹检测LC3蛋白
        1.2.7 SSC细胞的分离、鉴定
        1.2.8 SSC移植
2 结果
    2.1 一般情况
    2.2 热应激后小鼠睾丸组织形态学特征变化
    2.3 热应激后小鼠睾丸组织自噬水平变化
    2.4 热应激后小鼠睾丸组织凋亡水平变化
    2.5 SSC分离纯化、鉴定
    2.6 SSC生精小管移植
    2.7 SSC移植后增殖分化观察
    2.8 SSC移植后代表观遗传学特征观察
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
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[2]男性青少年肿瘤患者的生育力保护[J]. 傅龙龙,张开舒,谷翊群.  中华男科学杂志. 2017(03)
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本文编号：2934406