抗人纤维蛋白单链抗体的人源化及其链亲和素融合蛋白的研究

发布时间：2020-12-25 02:33

　　抗人纤维蛋白单链抗体scFv-8E5能特异性识别人纤维蛋白β链N端7肽，在血栓的定位诊断和导向溶栓治疗等方面有很好的应用前景。但鼠源性单抗用于临床的最大障碍是其高免疫原性，为了降低人抗鼠抗体反应，对scFv-8E5的重链和轻链可变区进行了人源化改造。从人免疫球蛋白基因数据库中挑选到与鼠源scFv-8E5重链（VH-8E5）同源性73.0％的人源免疫球蛋白HUMHCH109重链（VH）序列，作为人源化改造VH-8E5的框架；与其轻链（VL-8E5）同源性76.3％的人源免疫球蛋白KLC400轻链（VL）序列，作为人源化改造VL-8E5的框架。人工合成人源化VH-8E5和VL-8E5片段，用DNA连接酶连接成完整的人源化VH-8E5和VL-8E5，构建表达载体pOPE101-huVH-8E5、pOPE101-huVL-8E5和pOPE101-huscFv-8E5。转化JM109后用IPTG诱导表达。经聚丙烯酰胺电泳和ELISA证明表达产物分子量30KDa左右，人源化重链和人源化轻链对scFv结合人纤维蛋白能力均无明显影响，人源化scFv-8E5与亲本抗体scFv-8E5活性无明显差别，表明... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

合成DNA片段的连接产物

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【参考文献】：
期刊论文
[1]单链抗体分子与链亲和素融合蛋白的制备<英文>[J]. 许静,李文平,隋建华,宋增璇.  中国实验血液学杂志. 1999(02)
[2]鼠抗体OKT3结合位点的结构模拟和改形设计[J]. 孙键,沈如群,徐琳,陈润生,刘喜富,黄华梁.  生物物理学报. 1996(01)



本文编号：2936781