一种全人源IgG样抗EGFR/抗KDR双特异性抗体的构建与表达

发布时间：2020-12-26 21:52

　　为增强抗EGFR或抗VEGFR2（KDR）单克隆抗体的抗肿瘤作用,作者将抗人EGFR单克隆抗体（Cetuximab）可变区基因和抗人KDR单克隆抗体（m Ab-04）可变区基因融合并与人Ig G1的Fc段基因通过柔性肽连接在一起,得到全人源Ig G样抗EGFR/抗KDR双特异性抗体（Bi-Ab）的基因。将Bi-Ab基因插入载体p PICZα,转化毕赤酵母X-33并诱导表达。发酵液经硫酸铵沉淀法初步提取后采用Protein A亲和层析柱进一步分离纯化,得到电泳纯的Bi-Ab蛋白,其产量约为2.3 mg/L发酵液。表面等离子共振法（SPR）分析显示,Bi-Ab与EGFR或KDR的结合亲和力与其亲本Cetuximab或m Ab-04相近,表明该双特异性抗体Bi-Ab能与EGFR和KDR特异性结合,可用于进一步的抗肿瘤活性研究。 

【文章来源】：药物生物技术. 2015年03期

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料
2 方法
    2. 1 抗 EGFR / 抗 KDR Bi-Ab 的构建
    2. 2 抗 EGFR / 抗 KDR 双特异性抗体 Bi-Ab 的表达
    2. 3 抗 EGFR / 抗 KDR 双特异性抗体 Bi-Ab 的纯化
    2. 4 抗 EGFR / 抗 KDR Bi-Ab 的 Western blotting 鉴定
    2. 5 抗 EGFR / 抗 KDR Bi-Ab 与抗原亲和力的测定
3 结果
    3. 1 Bi-Ab 重组质粒的构建
    3. 2 Bi-Ab 的表达和纯化
    3. 3 Bi-Ab 的 Western blotting 鉴定
    3. 4 Bi-Ab 对两种抗原亲和力的测定
4 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]单克隆抗体药物研究进展[J]. 李壮林,姚雪静.  药物生物技术. 2014(05)
[2]双功能抗体药物研究进展[J]. 李锋,黎晓维,沈倍奋.  中国医药生物技术. 2014(04)
[3]抗KDR单链抗体阻断VEGF/KDR通路的活性研究[J]. 李海鑫,陈治国,陈晨,金海珍,张娟,王旻.  药物生物技术. 2014(01)
[4]治疗性抗体药物研究与发展趋势[J]. 王旻.  药物生物技术. 2011(02)



本文编号：2940513