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DEC-205靶向抗体的制备及其人源化改造

发布时间:2021-01-05 04:38
  单克隆抗体在生物制药领域有着广泛的应用。单克隆抗体不仅自身能够作为免疫调节分子应用于一些免疫系统紊乱性疾病,也可以作为靶向性载体将药物特异性地传输至目标靶点。DEC-205作为树突状细胞(Dentritic cells, DC)表面的模式识别受体(Pattern Recognition Receptors, PRRs),能够特异性的捕获抗原分子,加工递呈给机体免疫系统,诱导免疫反应。抗DEC-205单克隆抗体能够有效的增强这一过程。体外实验表明,经过DEC-205靶向抗体辅助的抗原递呈效率能够增强1000倍。DEC-205单克隆抗体做为载体在慢性感染性疾病及癌症等的免疫治疗中有巨大的应用前景。我们通过免疫大鼠进行细胞融合的方法得到一株抗人DEC-205分子的单克隆抗体1-17-2。经过抗体亚型分析,鉴定该抗体为大鼠IgG1、Kappa亚型。该抗体能够识别人树突状细胞表面DEC-205分子,并诱导DC细胞对抗体的内吞效应。我们通过ImageStream仪器检测到1-17-2抗体一旦与DC细胞结合,会引起DC细胞的内吞现象。该抗体作为载体能够应用于各种慢性感染性疾病及癌症等的免疫治疗中。然... 

【文章来源】:北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】:109 页

【学位级别】:博士

【文章目录】:
摘要
Abstract
缩略词表
第一章 引言
    1.1 DEC-205分子简介
        1.1.1 DEC-205作为抗原识别受体的发现
        1.1.2 DEC-205抗原递呈途径的研究
    1.2 DEC-205靶向抗体的免疫调节机制
        1.2.1 DEC-205靶向抗体在静息状态下诱导免疫耐受
        1.2.2 DEC-205靶向抗体在共刺激信号下增强免疫反应
        1.2.3 DEC-205靶向抗体递呈抗原途径的选择
        1.2.4 DEC-205靶向抗体刺激HIV患者细胞免疫应答
    1.3 抗体人源化方法综述
        1.3.1 基于理性化设计的抗体人源化方法
        1.3.2 基于经验的抗体人源化方法
    1.4 分子模拟技术在生物学中的应用
        1.4.1 分子模拟技术的理论基础
        1.4.2 同源建模的原理与方法
        1.4.3 分子动力学模拟的原理与方法
        1.4.4 分子对接的原理与方法
第二章 抗DEC-205单克隆抗体的制备及表达检测体系的建立
    2.1 前言
    2.2 材料方法
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 实验方法
    2.3 实验结果
        2.3.1 DEC-1和DEC-S抗原表达
        2.3.2 大鼠免疫以及抗体制备
        2.3.3 1-17-2单克隆抗体亚型的鉴定
        2.3.4 1-17-2单克隆抗体识别人DC细胞
        2.3.5 1-17-2抗体诱导DC内吞现象
        2.3.6 1-17-2抗体基因克隆及序列分析
        2.3.7 1-17-2抗体的体外重组表达
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三章 DEC-205单克隆抗体的人源化改造
    3.1 前言
    3.2 材料方法
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 实验方法
    3.3 实验结果
        3.3.1 抗体可变区序列分析
        3.3.2 1-17-2 Fab模型的构建
        3.3.3 人源化改造整体策略
        3.3.4 基于表位扫描的人源化替换
        3.3.5 人源化抗体的构建及亲和力检测
        3.3.6 人源化抗体的优化策略
        3.3.7 人源化替换突变体模型的构建
        3.3.8 关键位点氨基酸的确定
        3.3.9 关键位点氨基酸的分析
        3.3.10 优化抗体的构建及亲和力检测
        3.3.11 优化抗体诱导DC的内吞现象
    3.4 讨论
    3.5 小结
第四章 1-17-2 Fab与DEC-S结合位点的分析
    4.1 前言
    4.2 材料方法
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 实验方法
    4.3 实验结果
        4.3.1 DEC-S模型的构建及退火模拟
        4.3.2 DEC-S的结构模型及其评估
        4.3.3 DEC-S与1-17-2 Fab的分子对接
        4.3.4 抗原抗体复合物结合位点的分析
    4.4 讨论
    4.5 小结
参考文献
致谢


【参考文献】:
博士论文
[1]几类蛋白的结构预测及分子对接的理论研究[D]. 张媛.吉林大学 2005



本文编号:2958037

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