基于慢性疲劳综合征线虫模型的中药筛选及单体药效研究

发布时间：2017-04-10 13:04

  本文关键词：基于慢性疲劳综合征线虫模型的中药筛选及单体药效研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景：慢性疲劳综合征(chronic fatigue syndrome, CFS)由美国疾病控制和预防中心(CDC)于1988年正式命名,是一种持续时间≥6个月的原因不明的精神及躯体的亚健康状态,以疲劳、低热(或自觉发热)、咽喉痛、肌痛、关节痛、头痛、注意力不易集中、记忆力差、睡眠障碍和抑郁等非特异性表现为主的综合征,无法自行缓解,临床检查多无明显器质性改变。近年来随着社会生活方式改变,环境恶化等多方面因素影响,CFS发病人数呈逐年上升趋势,好发年龄为30-50岁之间的青壮年阶段,是白领工作人群早衰、猝死的重要危险因素,但现代医学对CFS的防治措施十分有限。在中医学中,CFS属于“虚劳”等范畴,早在《黄帝内经》中就对该类症状有详细描述,治疗方面也积累了丰富的经验。中医学者认为CFS的病机以肾精亏虚为主,治疗上多以补肾填精益气为主,且处方用药以自拟方和大方为主,对中药资源的合理使用及CFS的中医诊疗规范化均十分不利。因此从临床治疗常用方药中筛选鉴定出对CFS具有确切疗效的中药具有重要意义。动物实验中,小鼠CFS模型成本高、周期长、造模方式复杂且效果不够稳定,不适合作为初期的药物筛选模型,而秀丽隐杆线虫作为一种国际通用的模式生物,具有完整的神经、运动、消化和生殖系统,遗传背景清晰,整体生命功能活动及相关调控路径与人类具有高度同源性,且生存周期短,成本较低,符合实验动物伦理要求,样本量充足,可控性强,转基因操作灵活,可以观察到慢性应激疾病逐步进展对线虫寿命、行为、群体等多方面的影响,是适宜研究CFS的良好素材。本研究引入简单模式生物秀丽线虫及其转基因株进行CFS相关研究。Aβ1-42转基因秀丽线虫株能模拟蛋白稳态失衡所致CFS病理表现,结合线虫生存状态,能体现CFS缩短健康生存时间的整体疾病转归,并且成本低、周期短、检测指标稳定,是进行CFS相关药物筛选的合适模型。本研究旨在尝试利用线虫模型筛选防治CFS中药,并对药物对CFS干预效果进行初步探索,为扩展后续研究打下基础。目的：1.尝试利用转基因线虫模型模拟CFS蛋白稳态失衡的病理环节,筛选防治CFS的有效中药;2.利用多种应激线虫模型模拟CFS相关病理环节,以筛选出的补肾中药制何首乌为例,探讨其主要有效单体成分二苯乙烯苷对CFS线虫模型的防治效果。方法：1.中药筛选实验：利用蛋白失衡应激模型转基因线虫CL4176筛选药物,分组为对照组及药物干预各剂量组,对17种药物进行干预效果检测,观察蛋白毒性诱导的应激模式下,药物对线虫平均非瘫痪时间的作用效果;2.在高、中、低剂量组(TSG-125μM组、TSG-62.5μM组、TSG-25μM组)二苯乙烯苷干预下,观察成年线虫对体外环境的热应激(35℃)、氧化应激(胡桃醌250μ g/mL)及体内毒性蛋白应激(A β 1-42转基因突变株CIA176)的耐受能力和平均存活时间,并进一步评估二苯乙烯苷对正常状态下线虫平均生存时间、30s运动距离、第4天和第10天线虫肌肉细胞GFP数目、30s咽泵运动频次及生殖能力的作用效果。结果：1.利用蛋白失衡应激模型转基因线虫CL4176进行中药筛选：中药颗粒溶液直接添加入线虫标准培养基,从17种单味中药颗粒中筛选出2种可延长线虫模型平均非瘫痪时间的药物：淫羊藿、制何首乌,以制何首乌效果最佳。2.与空白对照组比较,二苯乙烯苷TSG-125μM组、TSG-62.5μM组可减轻蛋白毒性作用(P0.05),高中低干预各组均能增加线虫热应激存活时间(P0.05), TSG-125 μ M组可增加线虫氧化应激存活时间(P0.05)、TSG可右移野生型线虫的生存曲线,延长线虫平均生存时间及最大生存时间(P0.05)。与对照组比,高浓度干预组能增加线虫的运动距离和咽泵运动频次(P0.05),,延缓线虫第4天和第10天肌肉细胞核GFP荧光强度和数目的衰减(P0.05)。生殖能力各组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论：1.在利用转基因秀丽线虫CFS模型筛选17种单味中药颗粒过程中,发现淫羊藿、制何首乌均可延长线虫模型平均非瘫痪时间,以制何首乌效果最佳。2.制何首乌主要药效成分二苯乙烯苷能增强线虫对体内外环境压力的应激能力,延长线虫寿命,增加线虫的运动距离和咽泵运动频次,延缓线虫肌肉细胞的流失的同时未干扰线虫正常生殖力,可能成为防治人类CFS的有效药物。这些工作为二苯乙烯苷在防治CFS方面的进一步机制探索及药理研究打下基础。
【关键词】：应激 秀丽线虫 中药筛选 何首乌 二苯乙烯苷 慢性疲劳综合征
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R285;R-332
【目录】：

• 缩略词表5-6
• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-13
• 第一部分 利用转基因线虫蛋白失衡应激模型筛选中药13-27
• 1.1 实验材料14-18
• 1.1.1 实验生物14-15
• 1.1.2 主要试剂及药物15-17
• 1.1.3 实验仪器及设备17-18
• 1.2 实验方法18-20
• 1.3 结果20-23
• 1.4 讨论23-26
• 1.5 小结26-27
• 第二部分 TSG对慢性疲劳综合征线虫模型影响的研究27-46
• 2.1 实验材料28-29
• 2.1.1 实验生物28-29
• 2.1.2 主要试剂及药物29
• 2.1.3 实验仪器及设备29
• 2.2 检测指标及方法29-33
• 2.3 结果33-40
• 2.4 讨论40-45
• 2.5 小结45-46
• 研究结论及展望46-47
• 结论46
• 展望46-47
• 参考文献47-53
• 综述一53-60
• 参考文献57-60
• 综述二60-68
• 参考文献65-68
• 致谢68-70
• 在读期间所著文章和所获奖励70-71

【参考文献】

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1 沈自尹,陈瑜,黄建华,胡作为;EF延缓HPAT轴衰老的基因表达谱研究[J];中国免疫学杂志;2004年01期

2 王文健;沈自尹;张新民;陈素珍;张玲娟;吴波水;;补肾法对老年男性下丘脑-垂体-性腺轴作用的临床和实验研究[J];中医杂志;1986年04期

  本文关键词：基于慢性疲劳综合征线虫模型的中药筛选及单体药效研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：296747