中国结核菌耐多药和广泛耐药相关基因突变特征及MAS-PCR研究

发布时间：2017-04-10 15:02

  本文关键词：中国结核菌耐多药和广泛耐药相关基因突变特征及MAS-PCR研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：分析中国耐多药（MDR TB）和广泛耐药结核分枝杆菌（XDR TB）耐药相关基因的突变特征；建立与之相应的等位基因特异性多重聚合酶链反应（multiplex allele specific PCR，MAS PCR）技术，以实现对MDR TB与XDR TB的快速检测，为MDR TB与XDR TB的诊断和监测提供新的技术手段。 材料和方法： 1.采用比例法药敏试验，从全国23省收集的结核分枝杆菌菌株中筛选了230株MDR TB，27株XDR TB及64株敏感菌株用于本研究。研究菌株由中国疾病预防控制中心传染病预防控制所结核病实验室收集保藏并提供。 2.采用L-J培养基培养菌株，并通过CTAB（溴化十六烷基三甲铵）法提取全基因组DNA用于耐药相关基因的聚合酶链反应（PCR）扩增，PCR产物采用脱氧核糖核酸（DNA）测序分析。 3.利用基因测序技术，分别对321株试验菌株的katG基因，inhA调控区，ahpC－oxyR基因间隔区，，rpoB基因，gyrA, gyrB基因及rrs基因进行序列分析。 4.根据我国MDR TB及XDR TB耐药相关基因的突变特点，筛选与耐药高度相关的基因突变位点，建立与之相应的MAS PCR检测技术，对MDR TB及XDR TB进行快速检测。 5．利用MAS PCR技术对湖南省200株结核分枝杆菌临床分离株（含MDR TB，XDR TB，敏感菌株）进行检测验证，并与传统比例法药敏试验结果进行比较，评价MAS PCR技术的实用性。 结果： 1.257株耐多药和广泛耐药结核分枝杆菌中，14.0%的菌株inhA基因发生突变，58.4%菌株的katG基因发生突变，16.7%菌株的oxyR-ahpC基因发生突变，同时考虑这三种基因，异烟肼耐药相关基因突变检出率可达79.8%；91.1%菌株的rpoB基因发生突变，67.1%菌株的gyrA基因发生突变，7.6%菌株的gyrB基因发生突变，40.0%菌株的rrs基因发生突变。基因突变的主要位点为katG315（49.8%），inhA-15（9.4%），rpoB531（49.8%），526（22.6%）和516（10.5%），gyrA94（43.0%）和90（21.5%），rrs1401（40%）。 2.根据我国MDR TB及XDR TB耐药相关基因的特点，建立了与之相应的MAS PCR耐药检测技术。对200株临床分离株（43株MDR，其中4株XDR）进行了MAS-PCR检测。MAS-PCR与比例法药敏试验比较，异烟肼耐药检测的敏感性为72.5%（50/69），对利福平检测的敏感性为77.0%（40/52），检测氧氟沙星敏感性为66.7%（14/21），而卡那霉素为75%（3/4），四种药物检测的特异性均为100%。 结论： 1.我国耐多药结核菌异烟肼、利福平、氧氟沙星和卡那霉素耐药相关基因最常见突变为katG315、inhA-15，rpoB531、526和516, gyrA94和90，rrs1401。 2. MAS-PCR技术检测MDR-及XDR-TB耐药性简便、快速、特异性高，对MDR-及XDR-TB耐药早期诊断具有重要意义。
【关键词】：结核分枝杆菌 耐多药结核病 广泛耐药结核病 基因突变 MAS-PCR技术
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R446.5;R378.911
【目录】：

• Abbreviation（缩略词）4-5
• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 前言10-13
• 第一部分 中国耐多药和广泛耐药结核分枝杆菌耐药相关基因突变特征分析13-32
• 材料与方法13-19
• 一、实验材料13-15
• 二、试验方法15-19
• 实验结果19-26
• 一、药物敏感性实验结果19-20
• 二、耐药相关基因测序结果20-26
• 讨论26-28
• 结论28-29
• 参考文献29-32
• 第二部分 MAS-PCR 技术用于诊断耐多药和广泛耐药结核病的研究32-51
• 材料与方法32-39
• 一、实验材料32
• 二、实验方法32-39
• 结果39-44
• 1. 比例法检测药敏结果39-40
• 2. 测序结果40-42
• 3. MAS PCR 检测结核分枝杆菌耐药性结果42-44
• 讨论44-48
• 结论48-49
• 参考文献49-51
• 本研究基金资助项目51-52
• 已发表文章52-53
• 文献综述53-65
• 参考文献61-65
• 致谢65

【参考文献】

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4 韩喜琴,马s

本文编号：296945