细胞色素P450氧化还原酶基因多态性对其mRNA及活性的影响

发布时间：2017-04-10 15:09

  本文关键词：细胞色素P450氧化还原酶基因多态性对其mRNA及活性的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景 细胞色素P450氧化还原酶(Cytochrome P450oxidoreductase, POR)是存在于人肝微粒体中内质网膜上的一种黄素蛋白质。它传递电子给所有的微粒体细胞色素P450酶,进而实现个体对药物、致癌物等的代谢作用。目前还没有正常肝功能的中国人肝样本POR的详细报道。 目的 本研究检测POR基因多态性、POR mRNA表达水平及POR活性,并分析POR基因多态性对POR mRNA表达水平及POR活性的影响。分析POR mRNA表达水平与POR活性的相关性及POR基因多态性对POR mRNA与POR活性相关性的影响。另外,分析人口学因素对POR mRNA、POR活性及两者相关性的影响,提供POR的生理数据。 方法 POR基因多态性通过SnapShort进行分型分析。POR活性通过测定人肝微粒体中细胞色素C的还原来检测。POR mRNA表达水平通过荧光定量PCR方法测定,并以2-△Ct计算扩增结果。 结果 123例人肝样本POR基因8种SNP位点分型结果显示：POR基因SNP位点(rs17148944GA、rs2302433CT、rs1057868CT、rs41301394CT rs1135612AG、rs10954732GA、rs4732515TC、rs4732516CG)突变率分别为0.8%、6.9%、34.1%、34.1%、48.8%、50.8%、86.2%、86.2%。本研究样本中POR mRNA表达水平为0.047-1.25,差异26.6倍,中位数是0.28。125例正常肝功能的中国人每毫克微粒体中POR活性水平为26.91-125.77nmol/mg protein/min,差异4.67倍,其中位数为56.05nmol/mg protein/mki。另外,125例正常肝功能的中国人每克肝组织中POR活性水平为215-12323nmol/g liver/min,差异57.23倍,其中位数为2152nmol/g liver/min。 通过两种方法分析POR基因多态性分别对POR mRNA及POR活性的影响。首先,逐一分析POR基因单核苷酸多态性(SNP)对POR活性的影响,没有发现明显影响(P0.05)。然后,根据8种SNP,对POR基因进行单倍型分析,将123例样本分为14种单倍型,分析两两单倍型间的人肝中POR活性的差异性。结果显示：以每毫克微粒体为单位表示POR活性时,单倍型7(n=7)和单倍型8(n=8)相比,有4个SNP不同(rs1057868、rs41301394、rs4732515、rs4732516),导致两种单倍型样本间每毫克微粒体中POR活性有显著差异(P=0.008)。单倍型1(n=24)与单倍型7(n=7)相比,有4个SNP不同(rs157868、rs10954732、 rs1135612、rs41301394),导致两种单倍型样本间每毫克微粒体中POR活性有明显差异(P=0.011)。单倍型8(n=8)和单倍型10(n=36)相比,有3个SNP不同(rs1135612、rs4732515、rs4732516),导致两种单倍型样本间每毫克微粒体中POR活性有明显差异(P=0.015)。单倍型10(n=36)与单倍型1(n=24)相比,有4个SNP不同(rs1057868、rs10954732、rs1135612、rs41301394),导致两种单倍型样本间每毫克微粒体中POR活性有明显差异(P=0.028)。同样,单倍型6与单倍型11,单倍型8与单倍型11,单倍型1与单倍型11,单倍型6与单倍型8等两两基因型间每毫克微粒体中POR活性相比时,都表现出明显差异(P0.05)。而以每克肝组织为单位表示POR活性时,只发现单倍型7(n=7)分别与单倍型1(n=24)、单倍型6(n=6)相比时,每克肝组织中POR活性有明显差异(P0.05)。同样分析14种单倍型样本两两间POR mRNA表达水平的差异性。结果显示：单倍型3分别与单倍型1、单倍型7、单倍型8、单倍型10相比时,POR mRNA表达水平具有明显差异(P0.05)。 另外,分析POR mRNA与POR活性的总相关性,并分析POR基因多态性对POR mRNA与POR活性相关性的影响。结果显示：POR基因rs1057868位的基因型为TT纯合子突变的样本(n=11), POR mRNA与POR活性明显相关(r=0.675, P=0.023)。POR基因rs41301394位的基因型为TT纯合子突变的受试者(n=11), POR mRNA与POR活性明显相关(r=0.675,P=0.023)。单倍型8(rs1057868-rs4732516:TC-G-A-G-C-CT-TC-CG)(n=6)的POR mRNA与POR活性明显相关(r=0.885,P=0.019)。 人口学因素分析结果显示,年龄、性别对POR活性没有明显影响,吸烟(P=0.044)和饮酒(P=0.013)明显降低POR活性。而年龄、性别、吸烟、饮酒对POR mRNA表达水平均没有影响。男性的POR mRNA表达水平与POR活性明显相关(r=0.384,P=0.036),吸烟的样本POR mRNA表达水平与POR活性明显相关(r=0.658,P=0.028)。 结论 1.POR基因突变明显影响POR mRNA表达水平及POR活性。 2.吸烟和饮酒明显降低POR活性。 3.POR mRNA表达水平与POR活性总体没有明显相关性。 4.男性的PORmRNA表达水平与POR活性明显相关(r=0.384,P=0.036)。吸烟者的PORmRNA表达水平与POR活性明显相关(r=0.658,P=0.028)。 5.我们建立了从大量人肝样本得到的POR生物学数据,这些数据为研究中国人群的CYP酶对药物代谢的药代动力学提供了基本有用的信息。
【关键词】：细胞色素P450氧化还原酶 mRNA活性 中国正常人肝
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R3411
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 中英文对照缩略表11-12
• 引言12-14
• 实验材料14-19
• 实验方法19-27
• 实验结果27-48
• 讨论与分析48-53
• 结论53-54
• 参考文献54-57
• 综述 细胞色素P450氧化还原酶的相关研究的概述57-79
• 参考文献74-79
• 个人简历79-80
• 致谢80

【共引文献】

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本文编号：296962