人脐带间充质干细胞定向分化心肌样细胞的研究

发布时间：2017-04-10 23:02

  本文关键词：人脐带间充质干细胞定向分化心肌样细胞的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景 心脏疾病的干细胞治疗已成为人们关注的焦点。干细胞治疗心脏疾病及其作用机制亟待解决。在于细胞诱导分化心肌方面已多有报道,但大多集中在动物来源的间充质干细胞以及胚胎干细胞。近年来,由于人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mysenchymal stem cells, HUCMSCs)来源丰富,扩增和分化能力强,免疫原性较低,不涉及伦理问题,成为诱导分化心肌的热点,但使用缬沙坦(valsartan)胎儿心脏组织匀浆(Human fetal heart tissue extracts, HFHTE)诱导人脐带间充质干细胞未见报道。 目的 探讨缬沙坦、胎儿心脏组织匀浆诱导人脐带间充质干细胞体外定向分化心肌样细胞(cardiomyogenic cells)的可行性,以及二者之间是否存在相互作用。 方法 1.细胞培养：HUCMSCs使用生长培养液(含有10%胎牛血清+100U/mL青霉素+100μg/mL链霉素的低糖DMEM培养液)在饱和湿度、37℃、5%C02的培养箱内培养,每3d换液一次。当细胞融合达到80～90%时,使用0.25%胰酶(pH7.4)消化细胞,按照1：2的比例进行传代培养。 2.细胞诱导和分化：采用以下三种方案对]3UCMSCs进行诱导：(1)生长培养液+valsartan诱导24h,之后换为生长培养液分别继续培养至1W、2W和3W；(2)生长培养液+HFHTE诱导3d之后换为生长培养液分别继续培养至1W、2W和3W；(3)生长培养液+valsartan+HFHTE诱导3d,之后换为生长培养液分别继续培养至1W、2W和3W。 3.通过Reverse Transcription-PCR (RT-PCR)、Western blotting和免疫细胞化学检测Tbx5、GATA4、Nkx2.5、ANP、β-MHC、cTnl和cTnT的表达情况。 结果 1. RT-PCR、Western blotting和细胞免疫化学结果显示HUCMSCs在生长培养液内能表达心肌相关转录因子Tbx5、Nkx2.5,但不表达心肌特异蛋白cTnI和cTnT以及心肌发育相关基因ANP和β-MHC。 2. Valsartan诱导HUCMSCs后,Tbx5、GATA4和Nkx2.5的表达均上升,随后逐渐下降,峰值均在1W。3W时表达心肌特异蛋白cTnl(?)cTnT,但不表达心肌发育相关基因ANP和β-MHC。 3. HFHTE诱导HUCMSCs后,Tbx5、GATA4和Nkx2.5的表达均上升,随后逐渐下降,峰值均在2W。3W时表达心肌特异蛋白cTnI和cTnT,但不表达心肌发育相关基因ANP和β-MHC。 4. Valsartan+HFHTE诱导HUCMSCs后,Tbx5、GATA4和Nkx2.5的表达均上升,随后逐渐下降,其中Tbx5和Nkx2.5峰值在1W,GATA4峰值在2W。2W时开始表达心肌特异蛋白cTnI,3W时达到峰值。3W时表达心肌特异蛋白cTnT,2W和3W时微弱表达ANP,但不表达β-MHC。 结论 HUCMSCs在生长培养液内培养时能表达心肌相关转录因子GATA4. Tbx5以及Nkx2.5,但不能自发向心肌样细胞分化。Valsartan和HFHTE均能在体外诱导HUCMSCs向心肌样细胞分化,并且二者之间存在相互作用,能够促进分化进程。
【关键词】：缬沙坦 胎儿心脏组织匀浆 人脐带间充质干细胞 心肌样细胞 分化
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 实验材料12-16
• 实验方法16-22
• 结果22-31
• 讨论31-35
• 小结35-36
• 参考文献36-39
• 综述：人脐带间充质干细胞诱导分化心肌样细胞及其应用的研究进展39-51
• 参考文献46-51
• 附录51-52
• 攻读学位期间发表文章情况52-53
• 致谢53-54
• 个人简历54

【参考文献】

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本文编号：297733