HPV16、18、58型多价重组痘苗病毒构建及免疫效果研究

发布时间：2021-01-24 05:23

　　宫颈癌是危及全球妇女健康的严重疾病,在世界范围内发病率居女性恶性肿瘤第二位。宫颈刮片的筛查和疾病的治疗给人们带来了巨大的经济负担。大量的流行病学、分子生物学、病毒学和临床研究证实,宫颈癌及癌前病变的发生与高危型人乳头瘤病毒（HumanPapillomavirus,HPV）持续感染密切相关。宫颈癌病人的宫颈样本中可以检测到的HPV高危型别包括HPV16,18,45,31,33,58,52,35,59,56等,其中HPV16的检出率最高,其它高危型别在不同国家和地区检出率不同。我国宫颈癌患者中HPV16感染率最高为61.9%,居第二位和第三位的分别为HPV18（7.7%）和HPV58（6.4%）。因此,研制适用于我国包括HPV16、HPV18、HPV58等主要高危型别的多价治疗性疫苗,对HPV重度感染及相关肿瘤的人群治疗具有重要意义。HPVE6、E7蛋白持续在肿瘤细胞中表达,是形成肿瘤并维持恶性特征所必需的癌蛋白,正常组织中不存在这两种蛋白,因此E6和E7蛋白是目前HPV相关的宫颈癌及癌前病变治疗性疫苗的主要靶抗原。为安全起见,通常以修饰后去除了转化活性但仍保留抗原性的E6和E7蛋白作为靶... 

【文章来源】：中国疾病预防控制中心北京市

【文章页数】：131 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
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英文缩写
前言
材料与方法
结果
    第一部分 HPV16、HPV18、HPV58三个型别E6、E7抗原及相应抗体的制备和ELISA检测方法的建立
        1.HPV18型、HPV58型E6、E7基因在原核系统中的表达及鉴定
        2.HPV16、HPV18、HPV58三个型别E6、E7蛋白的纯化
        3.HPV16、HPV18、HPV58三个型别E6、E7蛋白相应抗体的制备
        4.ELISA检测方法的建立
        小结
    第二部分 表达E7E6融合蛋白的HPV18型、HPV58型和HPV16/18型重组痘苗病毒的构建及鉴定
        1.HPV16型、HPV18型和HPV58 E7E6目的基因的改造、克隆及鉴定
        2.HPV18型、HPV58型和HPV16/18型E7E6基因痘苗病毒重组质粒的构建及鉴定
        3.表达HPV18型、HPV58型E7E6融合蛋白的重组痘苗病毒构建及鉴定
        4.共表达HPV16/18型E7E6融合蛋白的重组痘苗病毒构建及鉴定
        讨论
        小结
    第三部分 重组痘苗病毒的免疫效果研究
        1.表达HPV16型E7E6融合蛋白的重组痘苗病毒免疫效果评价
            1.1 体液免疫和细胞免疫反应检测
            1.2 抗TC-1肿瘤细胞免疫效果评价
        2.表达HPV58型E7E6融合蛋白的重组痘苗病毒免疫效果评价
            2.1 RMAHPV58E7肿瘤细胞系的鉴定及荷瘤小鼠模型的建立
            2.2 体液免疫和细胞免疫反应检测
            2.3 抗RMAHPV58E7肿瘤细胞免疫效果
        3.表达HPV18型E7E6融合蛋白的重组痘苗病毒免疫效果评价
        4.共表达HPV16/18型E7E6融合蛋白的双价重组痘苗病毒免疫效果评价
            4.1 重组痘苗病毒在小鼠上的免疫效果评价
            4.2 重组痘苗病毒在恒河猴上的免疫效果评价
        5.共表达HPV16/18型E7E6融合蛋白的重组痘苗病毒与表达HPV58型E7E6融合蛋白重组痘苗病毒联合免疫效果评价
            5.1 体液免疫和细胞免疫反应检测
            5.2 抗TC-1肿瘤细胞免疫效果评价
            5.3 抗RMAHPV58E7肿瘤细胞免疫效果评价
        讨论
        小结
全文总结
参考文献
综述
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]中国妇女子宫颈人乳头瘤病毒型别分布的Meta分析[J]. 鲍彦平,李霓,王鹤,乔友林.  中华流行病学杂志. 2007(10)
[2]人乳头状瘤病毒16型不同基因疫苗联合免疫的实验研究[J]. 范江涛,赵莉,陈心秋,任皎,张卉,阮力,田厚文.  中华微生物学和免疫学杂志. 2006(06)
[3]HPV58型E7基因重组痘苗疫苗免疫保护作用的实验研究[J]. 罗利群,李洁,刘绣,张友会.  中国医学科学院学报. 2003(01)



本文编号：2996656