抗CD3人源化抗体的制备及生物学特性研究

发布时间：2021-01-30 09:48

　　为了克服鼠源性单克隆抗体应用于人体时所出现的严重过敏反应，人源化抗体应运而生，并很快成为十余年来国内外生物医学研究的重大热点之一。12F6是我所自制的抗人CD3的小鼠单克隆抗体，实验发现它竞争抑制OKT3、SK7及UCHT1等CD3单抗与抗原的结合并具有与OKT3相似的激活及抑制T细胞的功能，提示12F6有可能作为免疫抑制剂应用于急性移植排斥反应的治疗。但作为小鼠杂交瘤技术生产的抗体，12F6同OKT3一样存在鼠源抗体应用于人体时可能产生的一系列问题。因此，我们计划对12F6进行人源化改造，期望获得一个即保留高亲和力，免疫原性又大大下降的人源化抗体。首先采用5’RACE技术获得了12F6的可变区全长序列，在确定了12F6可变区中CDR区和FR区的范围之后，我们将CDR区直接移植到人源抗体模板的FR中，将获得的人源化轻、重链抗体基因克隆到表达载体共转染COS细胞，用流式细胞术测定其抗原结合活性，结果发现这个人源化抗体的亲和力基本完全丧失。为了重建人源化抗体的亲和力，我们对可能影响抗体亲和力的FR区重要残基进行回复突变分析。经过活性筛选，我们发现对于人源化重链来说，框架区残基6，23，24... 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：72 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 抗人CD3单抗12F6可变区基因的克隆
    1. 实验材料
    2. 实验方法
    3. 实验结果
    4. 讨论
第二部分 12F6人源化抗体的表达与筛选
    1. 实验材料
    2. 实验方法
    3. 实验结果
    4. 讨论
第三部分 12F6人源化抗体的生物学功能检测
    1. 实验材料
    2. 实验方法
    3. 实验结果
    4. 讨论
小结
参考文献
缩略词
综述
致谢



本文编号：3008687