炎症小体在肠神经胶质细胞激活中的表达及短双歧杆菌的干预作用研究

发布时间：2021-01-30 10:16

　　目的:观察炎症小体NALP3在脂多糖（LPS）激活的肠神经胶质细胞（EGCs）中的作用以及短双歧杆菌的干预作用。方法:采用LPS激活肠神经胶质细胞为肠神经胶质细胞的体外肠道炎症模型,造模后采用短双歧杆菌上清液干预。实验分组:空白组、炎症模型组（LPS干预组5 mg/孔）、短双歧杆菌干预组（MOI 1:40=上清液105μL/5×105cells）,采用免疫荧光检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及炎症小体NALP3的表达,PCR及Western blot分别检测NALP3,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase-1）,白介素1β（IL-1β）,转录因子（NF-κB）的RNA和蛋白的变化。结果:免疫荧光显示肠神经胶质细胞在LPS激活后表达GFAP、NALP3,而空白组仅表达GFAP; RTPCR及Western blot显示肠神经胶质细胞在LPS激活后较空白组高表达NALP3、Caspase-1、IL-1β、NF-κB RNA和蛋白,而短双歧杆菌干预组较肠神经胶质细胞LPS刺激炎症模型组明显下调NALP3、Caspase-1、IL-1β、NF-κB RNA和蛋白的表达。结论:肠神经胶... 

【文章来源】：内科急危重症杂志. 2019,25(04)

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

组中NALP3蛋白的表达

GCs经LPS刺激后GFAP、NALP3的表达表23组中NALP3，Caspase-1，IL-1β，NF-κB分子的ＲNA表达(x－±s)组别NALP3Caspase-1IL-1βNF-κB空白组0．86±0．100．22±0．030．57±0．070．90±0．10LPS干预组2．46±0．35*0．51±0．07*1．26±0．07*2．43±0．32*短双歧杆菌干预组1．06±0．20#0．24±0．04#0．83±0．03#1．13±0．11#注:与空白组比较，*P＜0．05;与LPS干预组比较，#P＜0．05图23组中NALP3蛋白的表达图33组中Caspase-1蛋白的表达图43组中IL-1β蛋白的表达图53组中NF-κB蛋白的表达炎症小体被多种刺激物激活，负责释放促炎症细胞因子［11］。一旦NALP3炎症体被激活，促天冬氨酸酶-1转变为活性caspase-1，并进一步将白介素-1β(pro-IL-1β)前体转化为常见的促炎细胞因子IL-1β，NLＲP3炎症小体的激活可诱导免疫细胞产生促炎细胞因子，参与天然免疫和炎症反应［12］。在本实验中，采用免疫荧光检测EGCs在LPS刺激后高表达GFAP及NALP3，而未被刺激的EGCs仅表达GFAP(EGCs经典标记物)，未表达NALP3，提示炎性刺激激活EGCs的同时，也激活NALP3的表达。采用PCＲ及Westenblot检测EGCs不同分组NALP3以及促炎症蛋白酶Caspase-1，白介素因子IL-1β，NF-κB信号通路的表达。LPS激活的EGCs与未予以炎性刺激的的EGCs比较，上调NALP3，Caspase-1，IL-1β，NF-κB的表达，显示在被活化的EGCs网络，炎症小体NALP3被激活，并招募和激活促炎症蛋白酶Cas

表达表23组中NALP3，Caspase-1，IL-1β，NF-κB分子的ＲNA表达(x－±s)组别NALP3Caspase-1IL-1βNF-κB空白组0．86±0．100．22±0．030．57±0．070．90±0．10LPS干预组2．46±0．35*0．51±0．07*1．26±0．07*2．43±0．32*短双歧杆菌干预组1．06±0．20#0．24±0．04#0．83±0．03#1．13±0．11#注:与空白组比较，*P＜0．05;与LPS干预组比较，#P＜0．05图23组中NALP3蛋白的表达图33组中Caspase-1蛋白的表达图43组中IL-1β蛋白的表达图53组中NF-κB蛋白的表达炎症小体被多种刺激物激活，负责释放促炎症细胞因子［11］。一旦NALP3炎症体被激活，促天冬氨酸酶-1转变为活性caspase-1，并进一步将白介素-1β(pro-IL-1β)前体转化为常见的促炎细胞因子IL-1β，NLＲP3炎症小体的激活可诱导免疫细胞产生促炎细胞因子，参与天然免疫和炎症反应［12］。在本实验中，采用免疫荧光检测EGCs在LPS刺激后高表达GFAP及NALP3，而未被刺激的EGCs仅表达GFAP(EGCs经典标记物)，未表达NALP3，提示炎性刺激激活EGCs的同时，也激活NALP3的表达。采用PCＲ及Westenblot检测EGCs不同分组NALP3以及促炎症蛋白酶Caspase-1，白介素因子IL-1β，NF-κB信号通路的表达。LPS激活的EGCs与未予以炎性刺激的的EGCs比较，上调NALP3，Caspase-1，IL-1β，NF-κB的表达，显示在被活化的EGCs网络，炎症小体NALP3被激活，并招募和激活促炎症蛋白酶Caspase-1。活化的Caspase-1切割


本文编号：3008722