iASPP单克隆抗体的制备与应用及iASPP新的剪接体（iASPP-SV）抑制p21 WAF1/CIP1 转录机制研究

发布时间：2021-02-02 00:33

　　第一部分抗人iASPP单克隆抗体的制备及研究应用实验目的:应用脾脏内注射真核iASPP-SV表达质粒免疫的方法制备抗人iASPP单克隆抗体（McAb）,并对其生物学特性进行初步研究。实验方法:RT-PCR方法克隆iASPP-SV编码区cDNA。将扩增所得到的全长基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1（+）中,并将iASPP-SV基因全长和基因片段克隆到原核表达载体pET28a中。诱导PIAF和PIAS载体在大肠杆菌Rosseta（DE3）中表达PIAF和PIAS蛋白。通过盐酸胍变性溶解包涵体,并经镍柱纯化得到重组PIAF和PIAS蛋白。采用脾脏内注射真核pcDNA3.1-iASPP-SV（CIAF）免疫Balb/c小鼠3天后,取小鼠脾脏与小鼠骨髓瘤细胞（NS1）用传统的淋巴细胞杂交瘤技术制备抗人iASPP单克隆抗体。应用原核表达的iASPP-SV全长及iASPP-SV片段His-tag融合蛋白进行间接ELISA法筛选阳性克隆。并对亚克隆后的阳性杂交瘤细胞株所制备的抗体的生物学功能进行了初步鉴定。实验结果:我们利用RT-PCR方法从人白血病细胞系U-937中克隆出癌基因iASPP-SV编... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：123 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

iASPP一SV的克隆

PIAS质粒EeoRI

工AF质粒EcoRI和


本文编号：3013711