结核杆菌PhoPR双组分系统过表达对新疆地区耐药结核杆菌临床分离株耐药性的影响及其机制研究

发布时间：2017-04-12 23:24

  本文关键词：结核杆菌PhoPR双组分系统过表达对新疆地区耐药结核杆菌临床分离株耐药性的影响及其机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：探讨研究结核杆菌PhoPR双组分系统过表达对单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株耐药性的影响。 方法：构建及鉴定重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR和pMV361-PhoPR,利用电穿孔技术将重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR和pMV361-PhoPR分别电转化至单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株,利用实时荧光定量PCR技术等检测及鉴定结核杆菌PhoPR双组分系统过表达的单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株,利用显色法测定最小抑菌浓度,检测及探讨研究结核杆菌PhoPR双组分系统过表达的单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株耐药性的变化。 结果：构建及鉴定了重组质粒pMV361-PloP、pMV361-PhoR和pMV361-PhoPR,构建及鉴定了结核杆菌PhoPR双组分系统过表达的单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株,利用刃天青显色法测定结核杆菌PhoPR双组分系统过表达的单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株的最小抑菌浓度,结果显示过表达PhoP基因、过表达PhoR基因和过表达PhoPR基因的单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株耐药性均明显提高。 结论：结核杆菌PhoP、PhoR和PhoPR基因过表达均可使单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株耐药性明显提高,为进一步研究结核杆菌PhoPR双组分系统对新疆地区结核杆菌耐药性调控作用机制奠定了基础。
【关键词】：结核杆菌 耐药 利福平 PhoPR双组分系统
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R378
【目录】：

• 摘要7-8
• Abstract8-9
• 中英文缩略词对照表9-10
• 前言10-12
• 材料和方法12-23
• 1 材料12-15
• 1.1 菌株12
• 1.2 质粒和载体12
• 1.3 主要试剂12-13
• 1.4 主要实验仪器设备13-14
• 1.5 主要试剂配制14-15
• 2 实验方法15-23
• 2.1 构建及鉴定结核杆菌PhoPR双组分系统重组质粒15-20
• 2.2 构建及鉴定过表达PhoP基因、过表达PhoR基因和过表达PhoPR基因的单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株20-22
• 2.3 检测过表达PhoP基因、过表达PhoR基因和过表达PhoPR基因的单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株的耐药性22-23
• 结果23-36
• 1 构建及鉴定结核杆菌PhoPR双组分系统重组质粒23-33
• 1.1 结核杆菌目的基因的PCR扩增23
• 1.2 大肠杆菌的培养及抗生素筛选23-24
• 1.3 目的基因连接T载体阳性克隆的PCR筛选24-25
• 1.4 重组质粒的酶切鉴定25-27
• 1.5 重组质粒的测序鉴定27-31
• 1.6 目的基因连接质粒pMV361阳性克隆的筛选31-32
• 1.7 同源重组质粒的酶切鉴定32-33
• 2 构建及鉴定过表达PhoP基因、过表达PhoR基因和过表达PhoPR基因的单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株33-35
• 2.1 各过表达PhoPR双组分系统的单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株的构建33-34
• 2.2 利用Realtime-PCR技术鉴定各过表达单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株PhoP/PhoR mRNA表达量34-35
• 3 检测过表达PhoP基因、过表达PhoR基因和过表达PhoPR基因的单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株的耐药性35-36
• 讨论36-39
• 结论39-40
• 参考文献40-42
• 文献综述42-51
• 摘要42
• 1 结核病的发病机制和双组分系统42-44
• 1.1 组氨酸激酶(HK)44
• 1.2 反应调节蛋白(RR)44
• 2 PhoPR在结核杆菌中的作用44-47
• 2.1 PhoP基因44-45
• 2.2 PhoP与ESAT-6和CFP-1045
• 2.3 PhoP对毒力的作用45-46
• 2.4 PhoP的交互作用46-47
• 2.5 PhoP与结核杆菌持留性47
• 2.6 PhoP突变株的细胞形态及体外生长要求47
• 2.7 PhoPR-抗结核药物的潜在目标47
• 3 展望47-48
• 参考文献48-51
• 附录51-52
• 致谢52-53
• 作者简介53-54
• 导评阅表54

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 李月恒;蒋丹;周智;;细菌天然密度感应系统抑制剂的研究进展[J];国际口腔医学杂志;2011年02期

2 杨薇;王迪;陈克清;于敏;王桂华;胡俊波;王晶;;质粒电穿孔转染条件的选择[J];华中科技大学学报(医学版);2009年06期

3 柳清云;孙刚;高谦;;结核分枝杆菌(MTB)异质性耐药研究进展[J];复旦学报(医学版);2013年01期

4 伊正君;付玉荣;许福亮;高昆山;李猛;李建花;;结核分枝杆菌调节蛋白RelA的原核表达及多克隆抗体制备[J];细胞与分子免疫学杂志;2012年02期

5 陈伟;袁俐;;结核分枝杆菌双组分系统PhoPR的研究进展[J];中国病原生物学杂志;2010年06期

6 王和;罗振华;徐艳;梁菁苹;;细胞壁缺陷结核分枝杆菌耐药性的基因研究[J];中国抗生素杂志;2007年10期

  本文关键词：结核杆菌PhoPR双组分系统过表达对新疆地区耐药结核杆菌临床分离株耐药性的影响及其机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：302315