SRC-3在HBV转录复制中作用的初步研究

发布时间：2017-04-13 07:03

  本文关键词：SRC-3在HBV转录复制中作用的初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：乙型肝炎(Hepatitis B)是一种在世界范围内流行的传染性疾病,由乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus, HBV)感染引起。慢性HBV感染容易诱发肝硬化和肝癌等高致死率的疾病,因此受到广泛关注。 类固醇激素受体辅激活因子-3(Steroid Receptor Coactivator-3, SRC-3)是p160辅激活因子家族的一员。SRC-3在细胞代谢和肝癌的发生发展中起到重要的作用,而这些过程也与HBV的复制密切相关,提示了SRC-3与HBV转录复制间可能存在相关性。 在本研究中,我们建立了流体动力学注射(Hydrodynamic Injection)感染HBV的小鼠模型,发现相对与野生型小鼠,感染HBV的SRC-3-/-小鼠的血清中含有更高水平的HBV抗原,其肝脏表达的HBV总mRNA水平也更高。在人肝癌细胞系HepG2中,降低SRC-3的表达水平可以提高培养液上清中HBV抗原水平和细胞内总mRNA水平。通过检测细胞抗病毒相关基因mRNA的表达水平,我们没有发现SRC-3对细胞清除病毒的机制产生明显影响,推测SRC-3可能影响HBV的转录。在HepG2细胞内,我们发现SRC-3的下调会导致Akt磷酸化水平降低,回补持续激活型Akt将重新抑制SRC-3敲低引起的HBV表达。在SRC-3-/-小鼠肝脏中的Akt磷酸化水平比WT小鼠较低。利用荧光素酶报告基因实验我们发现SRC-3可抑制HNF-4a诱导的HBV核心启动子活性。这些结果说明SRC-3通过增强Akt信号抑制HBV转录,并可能与HNF-4a的转录激活活性有关。
【关键词】：HBV SRC-3
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R3416
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 前言10-26
• 1. 乙型病毒性肝炎概述10-12
• 1.1 乙型肝炎的传播11
• 1.2 乙型肝炎病毒相关疾病11-12
• 2. 乙型肝炎病毒概述12-20
• 2.1 乙型肝炎病毒的基因组13-14
• 2.2 乙型肝炎病毒主要的功能蛋白14-17
• 2.3 乙型肝炎病毒的复制与转录调控17-20
• 3. 类固醇激素受体辅激活子-3(SRC-3)概述20-24
• 3.1 SRC-3的蛋白结构21-22
• 3.2 SRC-3的基因定位及表达22-23
• 3.3 SRC-3的功能和相关疾病23-24
• 4. 立题背景24-26
• 材料与方法26-42
• 1. 实验材料26-28
• 1.1 主要试剂及药品26-27
• 1.2 主要设备及器材27
• 1.3 细胞系27
• 1.4 菌株27
• 1.5 实验动物27-28
• 1.6 质粒28
• 2. 实验方法28-42
• 2.1 大肠杆菌感受态细胞制备28-29
• 2.2 质粒转化感受态细胞29
• 2.3 质粒的构建29-31
• 2.4 质粒DNA的提取31-33
• 2.5 动物组织基因组DNA提取33-34
• 2.6 小鼠基因型鉴定(PCR法)34-35
• 2.7 细胞培养35
• 2.8 细胞冻存与复苏35-36
• 2.9 细胞转染36
• 2.10 稳定转染细胞株的建立36
• 2.11 蛋白提取与蛋白浓度的测定36-37
• 2.12 蛋白质印记法37-38
• 2.13 RNA的提取38-39
• 2.14 逆转录cDNA39
• 2.15 实时荧光定量PCR39-40
• 2.16 荧光素酶报告基因实验40
• 2.17 流体动力学注射(Hydrodynamic Injection)40
• 2.18 HBsAg和HBeAg的ELISA检测40-42
• 结果与分析42-50
• 1. SRC-3抑制HBV在小鼠体内表达42-43
• 2. SRC-3抑制HBV在HepG2细胞中表达43-45
• 3. 未发现SRC-3与细胞抗病毒机制的相关性45
• 4. SRC-3通过增强PI3K-Akt信号通路抑制HBV表达45-47
• 5. SRC-3抑制HBV的Akt下游分子初探47-50
• 讨论50-52
• 参考文献52-60
• 致谢60

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 ;Hepatitis B virus X gene induces human telomerase reverse transcriptase mRNA expression in cultured normal human cholangiocytes[J];World Journal of Gastroenterology;2004年15期

2 Juergen Beck;Michael Nassal;;Hepatitis B virus replication[J];World Journal of Gastroenterology;2007年01期

3 Rocio Aller de la Fuente;María L Gutiérrez;Javier Garcia-Samaniego;Conrado Fernández-Rodriguez;Jose Luis Lledó;Gregorio Castellano;;Pathogenesis of occult chronic hepatitis B virus infection[J];World Journal of Gastroenterology;2011年12期

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本文编号：303040