重组登革病毒包膜蛋白第Ⅲ结构域抑制登革病毒感染的研究

发布时间：2021-02-17 06:49

　　目的通过原核基因工程技术获得登革2型病毒（DENV2）包膜蛋白第Ⅲ结构域（EDⅢ）重组蛋白,检测其抑制登革病毒感染细胞的效率。方法利用聚合酶链反应技术扩增DENV2编码EDⅢ重组蛋白的基因片段,构建pET28b（+）-EDⅢ原核表达载体并在大肠埃希菌中诱导EDⅢ重组蛋白表达,进行质谱鉴定。将登革病毒感染VeroE6细胞（经EDⅢ重组蛋白孵育）,根据空斑减少数量计算EDⅢ重组蛋白对登革病毒感染的抑制率。结果成功表达并纯化EDⅢ重组蛋白。EDⅢ重组蛋白可以抑制登革病毒感染的VeroE6细胞,且抑制率与蛋白水平呈正相关,当蛋白水平为100μg/mL时,病毒抑制率为90.5%。结论 DENV2EDⅢ重组蛋白能够抑制DENV2吸附和感染细胞,为以EDⅢ重组蛋白为靶标研制药物和疫苗提供重要的实验基础。 

【文章来源】：检验医学与临床. 2019,16(16)

【文章页数】：4 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株及载体来源
    1.2 仪器与试剂
    1.3 方法
        1.3.1 表达载体的构建与鉴定
        1.3.2 EDⅢ重组蛋白的诱导表达和纯化
        1.3.3 EDⅢ重组蛋白的鉴定
        1.3.4 EDⅢ重组蛋白抑制DENV感染细胞
2 结果
    2.1 重组原核表达载体pET28b（+）-EDⅢ的鉴定
    2.2 EDⅢ重组蛋白的表达与纯化
    2.3 重组蛋白EDⅢ的质谱鉴定
    2.4 EDⅢ重组蛋白抑制DENV感染VeroE6细胞
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]登革病毒包膜EDⅢ蛋白广谱中和抗体识别表位鉴定[J]. 易海粟,温坤,朱伟,陈静,车小燕,富宁,吴玉章.  免疫学杂志. 2015(07)
[2]登革病毒重组包膜蛋白表达及其应用的研究进展[J]. 郭勇晖.  广东医学. 2012(09)



本文编号：3037607