人类线粒体肌酸激酶的固定化及酶学性质研究

发布时间：2021-03-01 08:31

　　目的人源肌酸激酶u Mt CK具有良好的催化肌酸生成磷酸肌酸的活性,开发固定化u Mt CK酶法生成磷酸肌酸,实现其工业化应用价值。方法将异源表达的u Mt CK固定在纳米磁性材料Fe₃O₄@Histidine-Ni上,制备固定化酶Fe₃O₄@HistidineNi/uMtCK,并进行催化反应。与游离酶u MtCK比对酶学性质和动力学参数,测定固定化酶Fe₃O₄@Histidine-Ni/u Mt CK的重复使用次数。结果与游离酶u Mt CK相比,固定化酶Fe₃O₄@HistidineNi/u Mt CK的最适反应温度提高5℃,最适p H降低0.5个单位,在50℃、pH 7.5下孵育2 h,残余酶活为51%,而游离酶仅为27%;u Mt CK的KmCr为10.7mmol/L,为Fe₃O₄@Histidine-Ni/uMtCK的1.1倍; Fe₃O... 

【文章来源】：中国医药生物技术. 2019,14(04)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

扫描电子显微镜分析

中国医药生物技术2019年8月第14卷第4期ChinMedBiotechnol,August2019,Vol.14,No.4305相对活性（%）Relativeactivity(%)1101009080706050403020相对活性（%）Relativeactivity(%)1008060402001020304050600.51.01.52.02.5温度（℃）Temperature(℃)A时间（h）Time(h)B图4温度对uMtCK和Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的影响Figure4EffectsoftemperatureonuMtCKandFe3O4@Histidine-Ni/uMtCK相对活性（%）Relativeactivity(%)1101009080706050403020相对活性（%）Relativeactivity(%)1008060402003456789100.51.01.52.02.5pHA时间（h）Time(h)B图5pH对uMtCK和Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的影响Figure5EffectsofpHonuMtCKandFe3O4@Histidine-Ni/uMtCKFe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的最适作用温度为40℃，比uMtCK的最适反应温度高5℃。在50℃，pH7.5条件下测定uMtCK和Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的稳定性，由图4B结果显示，固定化酶Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK孵育2h以后残余51%的活性，而uMtCK仅残余27%的活性。2.3.2pH对酶活性的影响在不同pH值（4.0、5.0、6.0、7.0、7.5、8.0和9.0）、40℃下测定uMtCK和Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的活力，结果如图5A所示，uMtCK的最适pH为7.5，Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的最适pH

pH对uMtCK和Fe3O4

【参考文献】：
期刊论文
[1]人类线粒体肌酸激酶uMtCK的底物结合位点分析[J]. 孟浩毅,李丹阳,孙正阳,杨兆勇,张志斐,袁丽杰.  中国生物工程杂志. 2018(05)



本文编号：3057225